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產品名稱：豬流行性腹瀉病毒/傳染性胃腸炎病毒雙重熒光RT-PCR檢測試劑盒

規(guī) 格：50T/盒

反應體積：25μL

試劑類型：液體

【檢測原理】本試劑盒根據熒光 PCR 技術原理，針對 PCR試劑盒設計特異性引物和 Taqman 探針，通過熒光 PCR 檢測儀進行檢測，從而實現(xiàn)對 PCR試劑盒的檢測。

豬流行性腹瀉(Porcine Epidemic Diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的一種急性、高度接觸性腸道傳染病，對養(yǎng)豬業(yè)的危害大，所以及早確診對該病的防治具有特別重要的意義。豬流行性腹瀉病毒的傳統(tǒng)診斷方法主要有病毒的分離鑒定、免疫熒光抗體試驗、免疫電鏡觀察和ELISA等方法。但這些方法操作過程繁瑣、操作難度大，所需要時間較長，一性不強因此建立一種快速、高靈敏度的診斷方法對防治PEDV感染是十分必要的。

PEDV屬于冠狀病毒科(Coronaviridae)冠狀病毒屬(Coronavirus)，其基因組為單鏈正股RNA，其中膜蛋白(M)基因高度保守。本研究根據PEDV的M基因設計特異性檢測引物，提供了PEDV的快速、靈敏的鑒別診斷方法，采用RT-PCR技術檢測疑似感染仔豬糞便或腸道組織樣品中的PEDV。

【使用方法】

一、試劑準備（在試劑準備區(qū)進行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據待測樣本、陰性對照、陽性對照的數(shù)量，按下表1單反應體系配制方法，取相應量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應分裝到PCR反應管中，瞬時離心后備用。

表1：單反應體系配制方法

二、樣本準備（在樣本準備區(qū)進行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說明書進行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對照、待測樣本、陽性對照各5 μL加入到PCR反應管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應管轉移到擴增區(qū)進行上機。

三、PCR（在核酸擴增區(qū)進行）

1. 將上述PCR反應管按照實驗布局依次放入PCR儀對應檢測孔內，并記錄順序。

2. 按表2設置PCR擴增循環(huán)參數(shù)。

表2：PCR擴增相關參數(shù)

【結果分析】

表3：結果分析表

【注意事項】

1. 使用本試劑盒的實驗室，應嚴格按照國家有關基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理。

2. 各區(qū)域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測結束后，應立即對工作臺進行清潔消毒。

3. 吸取反應液時，應盡量避免產生氣泡。上機，應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結果不準確。

4. 檢測過程中使用過的吸頭，應直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內，檢測結束的PCR反應管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺及各種實驗用品應定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒。

6. 試劑使用應在常溫下充分融化并混勻。不同批號的試劑請勿混用，并在有效期內使用。

【儲存條件與有效期】

試劑盒應置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個月；

試劑盒反復凍融次數(shù)不宜超過5次。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司

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