詳細(xì)內(nèi)容

【產(chǎn)品名稱(chēng)】口蹄疫病毒A型熒光RT-PCR 檢測(cè)試劑盒(熒光RT-PCR法)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)的扁桃體、淋巴結(jié)等組織病變部與健康部交界處組織、全血等標(biāo)本中口蹄疫病毒A型RNA，適用于口蹄疫病毒A型感染的輔助診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，通過(guò)設(shè)計(jì)一對(duì)禽口蹄疫病毒A型特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)口蹄疫病毒A型的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【使用方法】

一、試劑準(zhǔn)備（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據(jù)待測(cè)樣本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照的數(shù)量，按下表1單反應(yīng)體系配制方法，取相應(yīng)量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應(yīng)分裝到PCR反應(yīng)管中，瞬時(shí)離心后備用。

表1：?jiǎn)畏磻?yīng)體系配制方法

試劑	反應(yīng)液	混合酶
用量	19 μL	1 μL

二、樣本準(zhǔn)備（在樣本準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測(cè)，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對(duì)照、待測(cè)樣本、陽(yáng)性對(duì)照各5 μL加入到PCR反應(yīng)管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行上機(jī)。

三、PCR（在核酸擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）

1. 將上述PCR反應(yīng)管按照實(shí)驗(yàn)布局依次放入PCR儀對(duì)應(yīng)檢測(cè)孔內(nèi)，并記錄順序。

2. 按表2設(shè)置PCR擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)。

表2：PCR擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)

體系		反應(yīng)體系設(shè)為25 μL
信號(hào)采集		選擇FAM通道檢測(cè)H5亞型； 選擇CY5通道檢測(cè)H7亞型； 選擇ROX通道檢測(cè)H9亞型。
PCR 反應(yīng) 條件	階段	條件	循環(huán)數(shù)
	逆轉(zhuǎn)錄	50℃：30 min	1
	預(yù)變性	95℃：5 min	1
	PCR	95℃：15 sec	45
		60℃：30 sec （此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào)）

 

【結(jié)果分析】

表3：結(jié)果分析表

實(shí)驗(yàn)成立 條件	陰性對(duì)照	三通道Ct＞38或者No Ct，線(xiàn)形為直線(xiàn)或輕微斜線(xiàn)，無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。
	陽(yáng)性對(duì)照	三通道Ct≤30且出現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線(xiàn)。
樣本結(jié)果 判定標(biāo)準(zhǔn)	H5亞型 陽(yáng)性	FAM通道Ct≤35且出現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線(xiàn)。
	H7亞型 陽(yáng)性	CY5通道Ct≤35且出現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線(xiàn)。
	H9亞型 陽(yáng)性	ROX通道Ct≤35且出現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線(xiàn)。

 

結(jié)果可疑	任一通道35＜Ct≤38，建議復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)結(jié)果仍為可疑，且出現(xiàn)明顯指數(shù)增長(zhǎng)，判為陽(yáng)性。否則為陰性。
結(jié)果陰性	Ct＞38或者No Ct，線(xiàn)形為直線(xiàn)或輕微斜線(xiàn)，無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。

【注意事項(xiàng)】

1. 使用本試劑盒的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)嚴(yán)格按照國(guó)家有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范進(jìn)行管理。

2. 各區(qū)域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測(cè)結(jié)束后，應(yīng)立即對(duì)工作臺(tái)進(jìn)行清潔消毒。

3. 吸取反應(yīng)液時(shí)，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡。上機(jī)，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確。

4. 檢測(cè)過(guò)程中使用過(guò)的吸頭，應(yīng)直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內(nèi)，檢測(cè)結(jié)束的PCR反應(yīng)管，切忌開(kāi)蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺(tái)及各種實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒。

6. 試劑使用應(yīng)在常溫下充分融化并混勻。不同批號(hào)的試劑請(qǐng)勿混用，并在有效期內(nèi)使用。

【儲(chǔ)存條件與有效期】

試劑盒應(yīng)置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個(gè)月；

試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過(guò)5次。

 

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

標(biāo)簽：口蹄疫病毒A型熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒   PCR試劑盒   

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