詳細(xì)內(nèi)容

一、貨號：CR2638（50mL純化量）

二、試劑原理：

本試劑盒利用不同蛋白需要的沉淀試劑和沉淀條件不同，通過大量實驗分析驗證而得到的一個與傳統(tǒng)沉淀純化相比有較大不同的精細(xì)的具有高活性、高產(chǎn)率、快速以及良好重復(fù)性的單克隆抗體的純化方法。

三、試劑特點：

本試劑盒特點在于純化操作的簡單化、所得抗體保持高活性和較高純度。實驗表明，本試劑盒可以得到90%以上純度的抗體；并且由于配方考究，抗體在純化過程中幾乎沒有損傷，完全保持應(yīng)有的活性；實際應(yīng)用好。

四、適用范圍：

本試劑盒適用于小鼠IgM類單克隆抗體腹水的純化，不能用于IgG和IgA類單克隆抗體腹水的純化實驗，如需要可選擇本公司其它貨號的純化試劑，它能為您帶來良好的結(jié)果。

五、試劑組成：

六、純化步驟：

1、 從冰箱中取出試劑盒放置室溫恢復(fù)溫度30分，期間可將單克隆抗體腹水從冰箱中取出，室溫避光復(fù)溫15分鐘，隨后用自來水邊沖邊搖勻快速解凍。

2、 將化開的單克隆抗體腹水8000-12000RPM 室溫 離心10分鐘。

3、 先吸棄上面浮沫和油脂，然后將上清轉(zhuǎn)出到另一個干凈容器或離心管；按每1毫升單克隆抗體腹水加入純化液A（加確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可） 1毫升（必須精確），室溫避光倒轉(zhuǎn)30分。

4、 8000RPM 室溫離心10-20分鐘，沉淀用純化液B溶解到原單克隆抗體腹水1/2體積，再按此體積每1毫升加入純化液C （加確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）1毫升（（必須精確），室溫避光倒轉(zhuǎn)10分鐘。

5、 8000RPM  室溫離心10-20分鐘，棄沉淀收集上清；每1毫升上清液加純化液D（加確定沒有試劑析出，如有析出搖晃溶解即可）  1毫升（必須精確），室溫避光倒轉(zhuǎn)20分鐘。

6、 8000RPM 室溫離心10-20分鐘，收集沉淀用純化液B收集溶解沉淀到原單克隆抗體腹水體積的1/3。透析袋用純水浸泡5分鐘，然后用手揉捏數(shù)次，接純水沖洗干凈，抗體放入扎好。透析液用純水溶解透析試劑到8L（也可先溶解到400ML，用時20X稀釋），將要透析的抗體袋子放入�？贵w體積：透析液體積=1:100，4℃透析過夜。收集透析后抗體。

7、 以透析后抗體體積：純化液E的體積=9：1的比例加入純化液E搖勻（也就是9體積抗體加1體積純化液E），靜置5min。8000RPM  室溫離心10分鐘，棄沉淀收集上清即為純化好的抗體。

8、 將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊�？贵w體積：透析液體積=1:50以上；4℃透析，中間換液三次，透析總時間不超過24小時。然后8000RPM 室溫離心10分鐘，收集上清測蛋白濃度并調(diào)控在5mg/ml左右后加10/萬NaN3防腐并除菌過濾-20℃?zhèn)溆谩?/font>

七、 注意事項：

1、 溶血嚴(yán)重和腐敗的腹水不得用于純化。

2、 離心溫度不要超過37℃。

3、 操作和量取試劑要細(xì)致精準(zhǔn),否則影響純度。

4、 不攪拌透析每次靜置透析時間不得低于4小時。

5、 如覺得透析太慢可以選擇超濾管。

6、由于單抗制備存在人工干預(yù)成分，現(xiàn)實中其少數(shù)IgM細(xì)胞株抗體結(jié)構(gòu)和性質(zhì)會有突變，如果確認(rèn)使用正確但沒有得到合適抗體，建議換用IgG純化試劑盒嘗試。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

標(biāo)簽：小鼠IgM類單抗（僅支持腹水中IgM單抗）純化試劑盒   

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