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瓊脂糖的凝膠性能介紹
瓊脂糖在水中一般加熱到90℃以上溶解,溫度下降到35-40℃時(shí)形成良好的半固體狀的凝膠,這是它具有多種用途的主要特征和基礎(chǔ)。瓊脂糖凝膠性能通常用凝膠強(qiáng)度表示。強(qiáng)度越高,凝膠性能越好。質(zhì)量較好的瓊脂糖強(qiáng)度通常在1200克/cm2以上(1%膠濃度)。瓊脂糖的凝膠性是由存在的氫鍵所致,凡是能破壞氫鍵的因素都能導(dǎo)致凝膠性的破壞。瓊脂糖具有親水性,并幾乎wan全不存在帶電基團(tuán),對(duì)敏感的生物大分子少引起變性和吸附,是理想的惰性載體。在瓊脂糖制備過(guò)程中需要把瓊脂果膠盡量去除,否則瓊脂糖有可能存在微量硫酸根和丙酮酸取代電離基團(tuán),就會(huì)造成電內(nèi)滲(EEO),電內(nèi)滲對(duì)質(zhì)點(diǎn)的移動(dòng)產(chǎn)生影響。質(zhì)量較好的瓊脂糖硫酸根含量比較低,通常在0.2%以下,電內(nèi)滲比較小,通常在0.13以下。這也就是瓊脂糖比瓊脂貴那么多的原因了。
1937年荒木次從瓊脂中分離出瓊脂糖,但直到1961年Hjertin先發(fā)現(xiàn)了瓊脂糖優(yōu)異的使用性能后才引起了越來(lái)越多的關(guān)注,并開(kāi)始工業(yè)生產(chǎn)。瓊脂糖廣泛應(yīng)用于臨床化驗(yàn)、生化分析和生物大分子物質(zhì)的分離等域。
瓊脂糖凝膠電泳的原理
瓊脂糖凝膠電泳是以瓊脂糖為介質(zhì),對(duì)不同大小的DNA 或 RNA 實(shí)現(xiàn)分離的一種電泳方法。瓊脂糖是一種多糖,具有親水性,但是不帶電荷。
使得 DNA 在堿性條件下使其帶負(fù)電荷(pH8.0 的緩沖液),在電流作用下,以瓊脂糖凝膠為介質(zhì),由負(fù)向正移動(dòng),根據(jù)不同的 DNA 分子片段的大小和形狀不同,在電場(chǎng)中泳動(dòng)的速率也不相同,同時(shí)在樣品中加入染料能夠和DNA 分子間形成絡(luò)合物,經(jīng)過(guò)紫外照射,可以看到 DNA 的位置,從而達(dá)到分離、鑒定的目的。
瓊脂糖凝膠電泳注意事項(xiàng)
底板一定要用膠帶封緊,否則灌膠時(shí)凝膠會(huì)漏出。可以在灌膠時(shí)先倒少量凝膠在交界處,利用凝固的凝膠將其封緊。
梳子一定不能插到底部,應(yīng)距離底部1-2mm,否則拔梳子時(shí)容易弄破凝膠,導(dǎo)致漏膠,加熱時(shí)應(yīng)注意不要讓瓊脂糖沸騰得太厲害,稍稍沸騰至溶液清涼,即其全部溶解即可,過(guò)度沸騰會(huì)導(dǎo)致凝膠實(shí)際濃度的提高。
將凝膠放入電泳槽時(shí)要注意性,不要正負(fù)顛倒。要注意撕去兩端的封帶,凝膠的濃度與待分離的DNA的大小有關(guān)。一般濃度為1%,低濃度的膠特別易碎,要注意。
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