從全血中提取DNA和RNA應(yīng)該說(shuō)是基本的工作了，提取的DNA和RNA質(zhì)量的好壞直接影響了下游的實(shí)驗(yàn)和分析，可供選擇的方法非常多，亂花漸欲迷人眼，如何選擇適合的方法，成了很多人實(shí)驗(yàn)開(kāi)始難以抉擇的事情。遠(yuǎn)慕生物從兩個(gè)方面，層層剝繭，分析佳的實(shí)驗(yàn)方法。
1、 全血的采集保存和DNA的提取
a、 用含抗凝劑的采血管進(jìn)行采血，抗凝劑一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不會(huì)影響下游的反應(yīng)，如果沒(méi)有采血管，也可以自己添加抗凝劑EDTA，提準(zhǔn)備0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液，顛倒混勻即可。保存于-20℃至-80℃，一般2-3年內(nèi)均可以提取，保存時(shí)間越短，提取的質(zhì)量越高，好在2個(gè)月內(nèi)提取。
b、 DNA提取方法的選擇：全血提取試劑盒一般有離心柱和溶液型兩種（比如Qiagen、Promega、Bioteke；摒棄酚氯仿手提的方法，時(shí)間長(zhǎng)毒性大），原理及步驟基本相同。雖然各公司推出了N多型號(hào)，讓人不知如何去選擇，但從原理和操作步驟看，基本就是離心柱和溶液型兩種。一般來(lái)說(shuō)，離心柱的提取純度高一些，但是處理量�。�0.1-1ml）、得率略低；溶液型的提取量大（1-10ml）得率也高于離心柱。醫(yī)院的血液標(biāo)本一般在2ml以上，一般選擇溶液型的方法提取.在說(shuō)到國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口差別的時(shí)候，很多人以為進(jìn)口一定比國(guó)產(chǎn)的好，我們覺(jué)得沒(méi)有好，只有更好！
c、 非抗凝血（凝固血）能否提��？答案是肯定的，而且一點(diǎn)都不麻煩，提取效果和抗凝血沒(méi)有差別！在你找遍了進(jìn)口的所有品牌都找不到后，回過(guò)頭來(lái)您才發(fā)現(xiàn)原來(lái)他就在身邊，遠(yuǎn)慕的凝固血基因組DNA提取試劑盒已經(jīng)有很多忠實(shí)的用戶。
2、 全血RNA如何提取
a、 全血RNA提取過(guò)程哪些是RNA降解的因素？
全血中RNA酶是非常豐富的，RNA在沒(méi)有保護(hù)的狀態(tài)下很容易降解！哪些是狀態(tài)RNA不受保護(hù)呢，比如紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞的過(guò)程，紅細(xì)胞裂解液是低濃度的平衡鹽溶液，沒(méi)有抑制RNase的成份，這時(shí)候RNA不受保護(hù)；DNA酶消化的時(shí)候RNA也不受保護(hù)，這個(gè)時(shí)候也沒(méi)有抑制RNase的成份。
b、 什么樣的提取方法更好？
我們?cè)谶x擇方法的時(shí)候要傾向于對(duì)RNA全程有保護(hù)的方法！一般的方法都是先用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，然后從白細(xì)胞提取核酸，還要經(jīng)過(guò)DNA酶的消化去除DNA，這種并不是好的方法，過(guò)程中有很多RNA降解的因素。所以直接裂解法是好的方法，將采集的血液迅速加入3倍體積的裂解液血液(液體樣本)總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)的裂解液，迅速顛倒混勻。裂解液RLS含有強(qiáng)烈的
蛋白變性劑，能迅速變性蛋白，是RNase變性，不能對(duì)RNA降解。裂解后的混合液還可以用來(lái)運(yùn)輸，以避免RNA降解。
客服一
