染色緩沖液（BSA）的配制：
PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱備用。
準(zhǔn)備單細(xì)胞懸液：淋巴組織、骨髓、血液或培養(yǎng)的細(xì)胞。
用冰染色緩沖液洗細(xì)胞2次，離心細(xì)胞，用冰染色緩沖液重懸細(xì)胞，使終濃度為2×107細(xì)胞/ml。
各取50ul（106細(xì)胞）細(xì)胞懸液到2個(gè)圓底的Ep管中。
根據(jù)
抗體說(shuō)明書(shū)在其中1個(gè)Ep管中加入合適的抗體量，另外1個(gè)加入同型對(duì)照抗體，冰上避光孵育20分鐘（建議每5分鐘輕輕混勻，以免細(xì)胞沉積）。根據(jù)熒光抗體的親和力適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。
用1ml染色緩沖液洗2次去除未結(jié)合的抗體，300×g離心5分鐘，每次離心后小心吸取上清。
用適量染色緩沖液（如500ul）重懸細(xì)胞。
流式細(xì)胞儀分析染色結(jié)果（不超過(guò)4小時(shí)）。如果暫時(shí)無(wú)法檢測(cè)，也可以將染色后的細(xì)胞用4%多聚甲醛固定后，避光儲(chǔ)存在4度。固定后的細(xì)胞可以保存zui多一個(gè)星期。
抗體規(guī)律：
（1）初次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)抗原次進(jìn)入機(jī)體時(shí)，需經(jīng)一定的潛伏期才能產(chǎn)生抗體，且抗體產(chǎn)生的量也不多，在體內(nèi)維持的時(shí)間也較短。
（2）再次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)相同抗原第二次進(jìn)入機(jī)體后，開(kāi)始時(shí)，由于原有抗體中的一部分與再次進(jìn)入的抗原結(jié)合，可使原有抗體量略為降低。隨后，抗體效價(jià)迅速大量增加，可比初次反應(yīng)產(chǎn)生的多幾倍到幾十倍，在體內(nèi)留存的時(shí)間亦較長(zhǎng)。
（3）回憶反應(yīng)產(chǎn)生抗體：由抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后可逐漸消失。此時(shí)若再次接觸抗原，可使已消失的抗體快速上升。如再次刺激機(jī)體的抗原與初次相同，則稱為特異性回憶反應(yīng)；若與初次反應(yīng)不同，則稱為非特異性回憶反應(yīng)。非特異性回憶反應(yīng)引起的抗體的上升是暫時(shí)性的，短時(shí)間內(nèi)即很快下降。
客服一
