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分析一下免疫組化實(shí)驗(yàn)中一些常見的問題和解決措施：

常見問題一：所有切片呈陰性
原因分析：
a.緩沖液內(nèi)含疊氮化鈉，抑制酶的活性；
b.染色未完全按照操作步驟進(jìn)行；
c.漏加一種抗體或抗體失活；
d.復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)；
e.底物中加入的過氧化氫少或失活。
解決措施：設(shè)立“陽性對照”。如果陽性對照有了表達(dá)，說明染色的全過程和所有試劑都沒有問題。如果此時(shí)測試片仍為陰性，便是真實(shí)的陰性，說明組織或細(xì)胞沒有相應(yīng)的抗原表達(dá)。

常見問題二：所有切片呈陽性
原因分析：
a緩沖液配置中未加氯化鈉和PH值不準(zhǔn)確，洗滌不徹底；
B使用已變色的呈色第五溶液，或呈色反應(yīng)時(shí)間過長；
C過氧化氫濃度過高，呈色反應(yīng)過快且粘附劑太厚；
D切片在染色過程中抗體過濃，或干片了；
E抗體孵育時(shí)間過長。
解決措施：縮短抗體孵育時(shí)間和呈色反應(yīng)時(shí)長，染色過程中防止出現(xiàn)干片情況。

常見問題三：切片背景過深
原因分析：
a.漂洗不夠；
b.切片或涂片過厚；
c.蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血
d.使用全血清抗體稀釋不夠；
e.底物成色反應(yīng)過久；
解決措施：對一些新的或少用的抗體顯色時(shí)進(jìn)行監(jiān)控，避免顯色時(shí)間過長。

常見問題四：切片邊緣著色
原因分析：
a組織邊緣與玻片粘貼不牢，邊緣組織松脫漂浮在液體中，導(dǎo)致洗滌不徹底；
b切片上滴加的試劑未充分覆蓋組織，邊緣的試劑容易先變干，濃度較中心組織高而致染色深。
解決措施：組織的期處理應(yīng)規(guī)范，試劑要充分覆蓋組織，盡量避免選用壞死較多的組織。