業(yè)內(nèi)周知，混合穩(wěn)定細(xì)胞株具有許多不同的穩(wěn)定細(xì)胞株。因?yàn)榉�(wěn)定化的整合過程常常與失活的宿主內(nèi)源基因的插入同時(shí)進(jìn)行，穩(wěn)定化的混合細(xì)胞株或比較多個單克隆穩(wěn)定化的細(xì)胞株是實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)。由此，我們淺析常見的3種穩(wěn)定細(xì)胞株篩選的發(fā)展情況。
其一、96孔單克隆稀釋法篩選穩(wěn)定細(xì)胞株
96孔單克隆稀釋法可用于低整合率的轉(zhuǎn)染法，或用于穩(wěn)定懸浮細(xì)胞系的單克隆細(xì)胞系和篩選實(shí)驗(yàn)。該方法的優(yōu)點(diǎn)在于理論上可得到非常均勻的單克隆
抗體，且能穩(wěn)定篩選細(xì)胞懸液，是目篩選穩(wěn)定且高產(chǎn)率細(xì)胞株的理想方法。其缺點(diǎn)是工作量較大，需要大量勞動力來不斷的分板、循環(huán)篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，已達(dá)到篩選高產(chǎn)率的穩(wěn)定性單克隆細(xì)胞的目的。
其二、單克隆環(huán)法篩選穩(wěn)定細(xì)胞株
單克隆環(huán)法主要用于整合率低的轉(zhuǎn)染法以及獲得單克隆細(xì)胞株。單克隆環(huán)法具有工作量小的優(yōu)點(diǎn)，只要把轉(zhuǎn)染體細(xì)胞按一定的細(xì)胞密度放入新的培養(yǎng)皿，用合適的藥物篩選并在培養(yǎng)皿中進(jìn)行擴(kuò)增，適合少量勞動力作業(yè)，其劣勢可能難以獲得高產(chǎn)率的穩(wěn)定細(xì)胞株。
其三、逆轉(zhuǎn)錄病毒的混合克隆技術(shù)篩選穩(wěn)定細(xì)胞株
此法可用于制備穩(wěn)定混合細(xì)胞株，其優(yōu)點(diǎn)在于能在短時(shí)間內(nèi)得到穩(wěn)定的細(xì)胞株，且能在任何時(shí)候?qū)⒓?xì)胞稀釋成新的培養(yǎng)皿，傾向于整合靠近轉(zhuǎn)錄始端的位點(diǎn)的基因，容易激活下游基因，但同時(shí)這些整合到轉(zhuǎn)錄活性基因的基因很容易導(dǎo)致整合部位基因的插入失效，影響到克隆的純度。高等細(xì)胞株中存在非整合細(xì)胞，這種混合細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞穩(wěn)定結(jié)合，不會失去生長的優(yōu)勢。
客服一
