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細(xì)菌細(xì)胞壁很薄，革蘭氏陽性菌的細(xì)胞壁為20~30nm，革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁為10~13nm。組成細(xì)菌細(xì)胞壁的主要化學(xué)成分是肽聚糖，它與染料結(jié)合的能力差，不易著色，在細(xì)菌的染色過程中，一般情況染料都是通過細(xì)胞壁的滲透、擴(kuò)散等作用而進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞壁本身并未染色。

實(shí)驗(yàn)方法原理： 根據(jù)細(xì)菌細(xì)胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理后，會產(chǎn)生質(zhì)壁分離這一現(xiàn)象，經(jīng)染色后也可在普通光學(xué)顯微鏡下區(qū)分細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)膜。

實(shí)驗(yàn)材料 ：巨大芽孢桿菌 枯草芽孢桿菌

試劑、試劑盒：結(jié)晶紫水溶液 單寧酸（鞣酸）水溶液 磷鉬酸水溶液 甲基綠水溶液 NaCl 結(jié)晶紫水溶液 Bouin氏固定液 硫堇水溶液 乙醚

儀器、耗材： 乙-醚蒸氣瓶

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.  單寧酸法

（1）將培養(yǎng)16~18小時(shí)的巨大芽孢桿菌按常法制成涂片。

（2）用5%單寧酸染5分鐘后，水洗。

（3）用0.2%結(jié)晶紫染3~5分鐘，水洗，吹干。用油鏡觀察，細(xì)胞壁呈紫色，細(xì)胞質(zhì)呈淡紫色。

2.  磷鉬酸法

（1）制備濃厚的涂片，在未干時(shí)浸入1%磷鉬酸水溶液3~5分鐘。

（2）用1%甲基綠水溶液染3~5分鐘。

（3）水洗后，吹干，用油鏡觀察。細(xì)胞壁為綠色，細(xì)胞質(zhì)無色。

3.  區(qū)分細(xì)胞壁與細(xì)胞質(zhì)膜

（1）乙醚蒸氣法

①將巨大芽孢桿菌涂布于蓋玻片上，翻轉(zhuǎn)蓋玻片使其放在乙醚蒸氣瓶的瓶口上蒸3分鐘。

②取下蓋玻片置Bouin氏固定液中30分鐘后取出，水洗。

③用硫堇染色30秒鐘。

④水洗，水封，置油鏡下觀察。

（2）NaCl法

①取一滴25%NaCl溶液于潔凈的載玻片上。

②挑一小環(huán)培養(yǎng)6小時(shí)的枯草芽孢桿菌，在25%NaCl水滴中涂布均勻，待自然干燥。

③滴加0.01%結(jié)晶紫于其上，使蓋滿有菌部分，30秒鐘后水洗，干燥，用油鏡觀察結(jié)果。