做
細胞生物學試驗,細胞鋪板大概是常見的一個試驗。但是有很多人不是很得辦法,鋪得不是很均勻:要么中心密周圍稀,要么周圍密中心禿頂。怎么辦呢?
一般 96 孔板,每孔是加 100 微升細胞懸液,從孔的左面接近底部參加,加完半邊板后,將未加的細胞懸液混一下再繼續(xù)加剩下的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手悄悄扶住板的左面,右手悄悄敲擊板的右邊際,注意把握力度(我一般輕巧敲三下),太強或次數(shù)太多會導致細胞會集成堆,將板順時針旋轉(逆時針效果不好),依次敲擊剩下三個邊,靜置約 5 分鐘,放入 37 度培育箱。
6 孔板、12 孔板或 24 孔板,均可選用將個孔參加少數(shù)無血清培育基,晃動滋潤整個孔底,然后用移液槍吸至第二孔,相同辦法滋潤孔底,其它孔一次類推,這樣整個孔底都是濕潤的,細胞懸液會平鋪在整個孔底,加細胞懸液的時分能夠避免加在中心,中心細胞多,而加在周邊晃勻后會呈現(xiàn)周邊細胞多中心少的現(xiàn)象,細胞渙散較均勻,注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。
細胞懸液加完后,將細胞培育板抬高,對著燈光,從底部往上看,看細胞有沒有抱團。然后從底部敲擊,使之渙散。假如試驗室有平板振蕩器的話,建議用這個
儀器稍振蕩一下,效果不錯,振幅小,頻率高。
細胞要盡量打散,大部分呈單個狀態(tài)。離心后,要充沛懸浮。還有轉移到六孔板后,需求晃動,晃的時分不要讓細胞液轉圈,不然細胞就全被帶到中心去了,就會不均勻。
一瓶細胞長滿后,正常處理,在培育瓶里吹勻,然后鋪 6 孔板,每孔 2 毫升,鋪完之后不必調查直接用酒精棉擦拭,然后放到培育箱里,輕微的左右前后各三圈。基本上 24 小時之后再調查,每孔的細胞都會很均勻。
計算好所需求的悉數(shù)液體量和細胞量,混勻后,加到六孔板里,六孔板按橫 8 字型晃,顯微鏡下調查,假如不均勻,按上述辦法再晃。假如細胞未計數(shù)直接種的話,在種六孔板的過程中,隨時晃一下混勻用的瓶子。
放在水平板面上先上下移動,再左右移動,每個方向 5 到 6 次,但要害的是搖晃后直接放入培育箱中,不要再做過多的運動,例如放到鏡下去看,不然很簡單就又聚到中心去了。