1、讓凝膠電泳變得更快,更漂亮
方法改進(jìn):將電泳電壓進(jìn)行定時(shí)變化,例如可以在開(kāi)始時(shí)將電泳電壓調(diào)節(jié)至 100V,大約 15min。
使條帶的確可以因?yàn)樽陨砥未笮〔煌a(chǎn)生較大差別的泳動(dòng)速度,從而將片段分離,然而現(xiàn)在的分離或許會(huì)間距較小,從而圖片很不漂亮,或者不易觀察.可以緊接著進(jìn)行 120V-130V 的電壓進(jìn)行較小差 異電泳,但是由于電泳電壓較大,可以避免過(guò)大的片段殘存在膠孔不易泳動(dòng)的情況.
結(jié)果:這樣兩個(gè)電壓進(jìn)行配合電泳,便可以得到非常漂亮的電泳條帶,并且可以節(jié)省 1/5-2/5 左右 的時(shí)間.
2、RNA 電泳如何得出漂亮的條帶
方法改進(jìn):1.電泳槽,制膠器,梳子等的清洗:去污劑浸泡過(guò)夜——>自來(lái)水沖洗干凈——>ddH20 沖洗——>3%H2O2 灌滿(mǎn)浸泡過(guò)夜——>滅活的 0.1%DEPC水沖洗干凈——>超凈臺(tái)內(nèi)紫外線(xiàn)照射過(guò)夜. 2.燒瓶,燒杯,藥匙,量筒等制膠器械的清洗:0.1%DEPC 水浸泡過(guò)夜后高壓消毒滅活,烘箱烘干.
或 者 ddH20 清洗干凈, 超凈臺(tái)內(nèi)紫外線(xiàn)照射過(guò)夜. 3.電泳緩沖液必須是 RNase free. 4.預(yù)電泳 5-10min 減少了非特異 RNA 條帶的出現(xiàn),有利于分離和純化,同時(shí)可根據(jù)電泳儀是否冒泡判斷電 泳儀裝置是否有誤.
5.樣品是在電泳緩沖液液略低于膠表面而不是在高過(guò)膠面時(shí)加進(jìn)齒槽,避免了加樣 時(shí) RNA 的擴(kuò)散,加樣后 RNA 從齒槽逸出造成 RNA 的彌散及定位不良等現(xiàn)象. 6.電泳 3-5min 讓 RNA 進(jìn)入凝膠后再加電泳緩沖液液高過(guò)表面,確保了加到每個(gè)槽中的 RNA 量及定位的準(zhǔn)確性,從而有利于 DNA 的鑒定和純化.
3、如何提高 SDS-PAGE 的分辨率
方法改進(jìn):借鑒 Tricine-SDS-PAGE 中添加甘油或者尿素來(lái)提高分辨率的成功經(jīng)驗(yàn),在普通的 SDS-PAGE 中加入約 13%的甘油,同樣可以提高分辨率,有效防止小分子量
蛋白的彌散.只要把原來(lái) 配方中的水換成 60%的甘油,就可以了.
結(jié)果:加入甘油之后,條帶較細(xì),分得更開(kāi).
4、改進(jìn)一點(diǎn)點(diǎn),我們能得到更加美觀的 SDS-PAGE 膠
方法改進(jìn):所做的改進(jìn)很簡(jiǎn)單卻很有效,加完分離膠后,用移液槍吸取酒精(濃度沒(méi)有特別要求, 干凈無(wú)污染就好)加到分離膠上至覆蓋界面,靜置片刻后放到 37℃恒溫箱中可加速膠的凝固.待到分 離膠完全凝固之后倒去上層的酒精,就可以看到齊平漂亮的界面啦!
改進(jìn)二:脫色 背景:給染色結(jié)束的 SDS-PAGE 膠脫色往往需要比較長(zhǎng)的時(shí)間,否則會(huì)由于脫色不完全而導(dǎo)致條 帶不清晰,影響到拍照的效果.
方法改進(jìn):改進(jìn)的方法很簡(jiǎn)單易行——取一張我們常常隨身攜帶的面巾紙,打個(gè)結(jié)放入盛有脫色液 的大培養(yǎng)皿里放到脫色搖床上,這樣一來(lái),原來(lái)過(guò)夜脫色達(dá)到的效果現(xiàn)在只需要短短的 3,4 個(gè)小時(shí)就 可以輕松實(shí)現(xiàn)了. PS:希望大家這個(gè)時(shí)候用的面巾紙是質(zhì)量比較好不容易掉屑的...
客服一
