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革蘭氏染色(Gram stain)是細(xì)菌學(xué)比較廣泛使用的鑒別染色方法,革蘭氏染色的主要步驟是:細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色,而后經(jīng)碘液進(jìn)行媒染,之后用酒精脫色,在一定條件下有的細(xì)菌媒染后的顏色不會脫去,有的可以被脫去。
前者叫做革蘭氏陽性菌,后者為革蘭氏陰性菌。為方便進(jìn)一步觀察,脫色后再用堿性蕃紅進(jìn)行復(fù)染,陽性菌仍為紫色,陰性菌染成紅色,這就是革蘭氏染色的原理。
其實(shí)還有一種方法,能更有效的鑒別與分析活細(xì)菌與死細(xì)菌,即遠(yuǎn)慕生物推薦的活細(xì)菌染色試劑盒:MycoLight™ Flow Cytometric Live Bacteria Assay Kit流動流式細(xì)胞術(shù)活細(xì)菌檢測試劑盒以及MycoLight™ Live Bacteria Fluorescence Imaging Ki活細(xì)菌熒光成像試劑盒。
這款產(chǎn)品的作用原理是:MycoLight™520是一種非熒光酯酶底物,可擴(kuò)散到革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌中。在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)非特異性酯酶水解后,產(chǎn)生綠色熒光產(chǎn)物并在細(xì)菌內(nèi)積累。與常用的酯酶底物CFDA和CFDA-AM相比,該活細(xì)菌染色試劑盒可提供更明亮,更穩(wěn)定的信號,背景更低,染色方案更容易。
《免疫熒光顯微鏡-Cat#22409》
用CFDA或MycoLight™活細(xì)菌熒光成像試劑盒染色的大腸桿菌的熒光圖像。CFDA在成像之前需要洗滌步驟以*小化背景,而使用該試劑盒不需要洗滌(Cat#22409)。MycoLight™520的染色效率遠(yuǎn)高于CFDA,因?yàn)楦嗟募?xì)菌顯示出綠色熒光。在染色1小時后,MycoLight™520的信號仍留在細(xì)胞中,而CFDA很容易漏出。在每個樣品中呈現(xiàn)相同量的細(xì)菌,并且在相同的暴露時間下拍攝熒光圖像。
《流式細(xì)胞儀-Cat#22407》
使用ACEA NovoCyte流式細(xì)胞儀在FITC通道中分析大腸桿菌懸浮液的相對活力。讀數(shù)(計數(shù)(%))獲自各種活/死大腸桿菌混合物。通過兩個不同的峰可以容易地區(qū)分每種混合物中的活的和死的種群。
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