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阿儀網(wǎng)咨詢遠(yuǎn)慕Calcein-AM/PI活
細(xì)胞/死細(xì)胞雙染
試劑盒:
Calcein-AM是一種對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑,發(fā)綠色熒光(Ex=490nm, Em=515nm)。因其在傳統(tǒng)的Calcein(鈣黃綠素)基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基團(tuán),增加了疏水性,使其能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。一旦進(jìn)入細(xì)胞后,Calcein-AM(本身不發(fā)熒光)被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)并發(fā)出強綠色熒光。與其它同類試劑(如BCECF-AM和CFDA)相比,由于Calcein, AM細(xì)胞毒性極低,是*適合用于活細(xì)胞染色的熒光探針,而且不會抑制任何的細(xì)胞功能,如增殖和淋巴球的趨化性。
由于死細(xì)胞缺乏酯酶,Calcein-AM僅用于對活細(xì)胞的細(xì)胞生存能力測試和短期標(biāo)記。
因此,Calcein-AM常常與死細(xì)胞熒光探針如碘化丙啶(PI)等聯(lián)合使用,同時進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞的熒光雙重染色。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)不能穿過活細(xì)胞的細(xì)胞膜,僅能穿過死細(xì)胞膜的無序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核,并嵌入細(xì)胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(Ex=535 nm, Em=617 nm),因此PI僅對死細(xì)胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā),因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。而用545 nm激發(fā),僅可觀察到死細(xì)胞。
本試劑盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的雙重染料,來進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色標(biāo)記,從而進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞水平的分析。根據(jù)我司優(yōu)化的實驗體系,單次就200?l細(xì)胞懸液進(jìn)行染色,分別可以做500次(CAS: 40747ES76)和1000次(CAS: 40747ES80)檢測。