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昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) (baculovirus expression vector system, BEVS) 以昆蟲桿狀病毒為外源基因載體, 昆蟲和昆蟲細(xì)胞為受體的表達(dá)系統(tǒng)。昆蟲細(xì)胞與哺乳動(dòng)物細(xì)胞翻譯和翻譯后蛋白修飾的模式與能力相似,包括糖基化、磷酸化、酰基化、信號(hào)肽切除及肽段的切割和分解等,得到的重組蛋白抗原性、免疫原性和功能等生物活性與天然蛋白相似;能容納大分子的插入片段;容易實(shí)現(xiàn)大規(guī)模低成本生產(chǎn)。該系統(tǒng)日益受到人們的重視和廣泛應(yīng)用。目前常用的 BEVS 系統(tǒng)有:
1. Bac to Bac 系統(tǒng):基于 Luckow1993 年的方法,此系統(tǒng)采用桿狀病毒穿梭載體,利用了轉(zhuǎn)座子 Tn7 位點(diǎn)特異的轉(zhuǎn)座作用,使轉(zhuǎn)移載體和桿狀病毒 DNA 在大腸桿菌中生成重組桿狀病毒桿粒。隨后,將重組桿狀病毒桿粒轉(zhuǎn)染到昆蟲細(xì)胞內(nèi),生成重組桿狀病毒。
2. BaculoDirect 系統(tǒng):線性化的桿狀病毒 DNA 兩端含有 attR 位點(diǎn),且兩 attR 位點(diǎn)位點(diǎn)間有 HSV1 tk 基因,目的基因通過 Gateway 技術(shù)克隆到入門載體上,通過 LR 反應(yīng)的重組 DNA 轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞,經(jīng)更昔洛韋(ganciclovir)負(fù)選,得到含目的基因的重組病毒。
3. BacPAK6 和 BaculoGOLD 系統(tǒng):這兩個(gè)系統(tǒng)都是將桿狀病毒 DNA 經(jīng) Bsu36 I 酶切后線性化,核衣殼編碼基因的 ORF1629 部分缺失,不能在昆蟲細(xì)胞中復(fù)制,和轉(zhuǎn)移載體共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后,通過同源重組,缺失的復(fù)制必需基因和外源基因一起重組到病毒 DNA 后,才能存活。但有時(shí)會(huì)有 AcNPV DNA 線性化不完全,重組后仍需要通過空斑實(shí)驗(yàn)篩選重組桿狀病毒。
4. FlashBAC 系統(tǒng):第二代桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng),該系統(tǒng)缺失了 AcNPV DNA 復(fù)制必需基因(核衣殼編碼基因的 ORF1629)的一部分,用一段人工合成的基因(bacterial artificial chromosome,BAC) 替代多角體編碼區(qū),改造后的環(huán)狀桿狀病毒不能在昆蟲細(xì)胞中復(fù)制,當(dāng)與轉(zhuǎn)移載體共轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞后,通過同源重組重新獲得復(fù)制必需基因片段并將目的基因轉(zhuǎn)移到桿狀病毒基因組中,只有發(fā)生同源重組的病毒才能在昆蟲細(xì)胞中復(fù)制,從而實(shí)現(xiàn)在昆蟲細(xì)胞中一步法生產(chǎn)重組桿狀病毒,無(wú)需進(jìn)行任何篩選。
因?yàn)橹亟M原理相同,其中 flashBAC,BacPAK6 和 BaculoGOLD 這三個(gè)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)移載體可以互換使用,方便各桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)之間的互換和嘗試。
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