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    環(huán)氧化酶-2（COX-2）抑制劑篩選試劑盒（Cyclooxygenase 2 Inhibitor Screening Kit，也稱COX-2 Inhibitor Screening Kit）是一種利用熒光檢測，簡單、快速、靈敏地用于人COX-2抑制劑高通量篩選的試劑盒。
 

    環(huán)氧化酶（cyclooxygenase, COX）又稱前列腺素內氧化酶合成酶（Prostaglandin-endoperoxide synthase, PTGS），是一種同時具有環(huán)氧化酶和過氧化氫酶活性的雙功能酶。例如，COX的環(huán)氧化酶活性可以催化花生四烯（Arachidonic Acid, AA）轉化為前列腺素G2（prostaglandin G2, PGG2），而COX的過氧化氫酶活性又可以將前列腺素G2轉化為前列腺素H2（prostaglandin H2,PGH2）。
 

    有兩種常見的COX，一種是組成性表達的COX-1，另一種是誘導性表達的COX-2。哺乳動物的COX-1與COX-2的分子量相似，分別是70和72KDa，其氨基酸序列有65%同源，其中酶催化活性區(qū)域的氨基酸序列幾乎一致。COX-1在很多組織中組成性表達，在胃粘膜、腎臟等中高表達，催化產生維持正常生理功能的前列腺素，從而參與血管舒縮、血小板聚集、胃粘膜血流、胃黏液分泌及腎臟功能等的調節(jié)。COX-2在正常生理狀態(tài)下幾乎不表達或表達很少，僅在腦、腎臟和生殖器官等中有一定水平的組成性表達。COX-2在巨噬細胞、成纖維細胞、內皮細胞和單核細胞等發(fā)生炎癥反應時，可以被誘導表達。例如受炎性刺激物、損傷、有絲分裂原或致癌物質等促炎介質誘導后，COX-2的表達增高，從而參與多種病理生理過程。COX-3是COX-1的不同剪接體，和COX-1相比，COX-3多保留了一個內含子，在狗（dog）中該內含子的長度為93個堿基，而在人和小鼠中長度為94個堿基，因此在狗中COX-3是有酶活性的，而人和小鼠中的COX-3由于移碼突變而沒有酶活性。
 

    COX-2與炎癥和腫瘤等的發(fā)生發(fā)展密切相關。因此，COX-2的選擇性抑制劑成為藥物研究的一個熱點。1991年1月個真正意義上的COX-2選擇性抑制劑塞來昔布（Celecoxib）經美國FDA批準上市，同年5月第二個選擇性抑制劑羅非昔布（Rofecoxib）也在歐洲上市。這些COX-2抑制劑藥物成功上市，為后續(xù)COX-2選擇性抑制劑的研究和發(fā)展開辟了廣闊道路。如今在臨床上COX-2選擇性抑制劑已經被廣泛用于治療類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、牙痛、手術后疼痛以及腫瘤等疾病。
 

    在輔助因子（Cofactor）存在的情況下，COX-2使用其環(huán)氧化酶（COX）活性把花生四烯酸（Arachidonic Acid）等底物環(huán)氧化生成PGG2等中間產物，繼而COX-2使用其過氧化物酶（peroxidase）活性把PGG2等中間產物催化生成PGH2等*終產物，同時把幾乎沒有熒光的COX-2探針（Probe）催化生成有強熒光的探針（Ex560/Em590）。這樣通過熒光檢測就可以非常靈敏地檢測COX-2的酶活性。如果在反應中加入COX-2抑制劑（Inhibitor），熒光的生成就會被抑制，熒光強度與抑制劑的抑制效果成反比，這樣就可以檢測出抑制劑的抑制效果。本反應生成的強熒光探針的激發(fā)波長為571nm，發(fā)射波長為585nm，推薦檢測時的激發(fā)波長為560nm ，發(fā)射波長為590nm。
 

    本試劑盒中提供了人重組COX-2（recombinant human COX-2, rhCOX-2）、底物（Substrate）、輔助因子（Cofactor）、陽性對照COX-2抑制劑（Celecoxib）及可以被COX-2催化產生熒光的熒光探針（Probe），并且對COX-2和底物的使用量進行了優(yōu)化。不僅能檢測出IC50很低的抑制劑，也能檢測出IC50較高的抑制劑。