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紙片擴(kuò)散法
該法是將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測(cè)試菌的瓊脂表面上,紙片中的藥物在瓊脂中擴(kuò)散,隨著擴(kuò)散距離的增加,抗菌藥物的濃度呈對(duì)數(shù)減少,從而在紙片的周圍形成濃度梯度。同時(shí),紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的菌株不能生長(zhǎng),而抑菌范圍外的菌株則可以生長(zhǎng),從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈,不同的抑菌藥物的抑菌圈直徑因受藥物在瓊脂中擴(kuò)散速度的影響而可能不同,抑菌圈的大小可以反映測(cè)試菌對(duì)藥物的敏感程度,并與該藥物對(duì)測(cè)試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)。
稀釋法
稀釋法藥敏試驗(yàn)可用于定量測(cè)試抗菌藥物對(duì)某一細(xì)菌的體外活性,分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。實(shí)驗(yàn)時(shí),抗菌藥物的濃度通常經(jīng)過(guò)倍比(lg2)稀釋,能抑制待測(cè)菌肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的藥物濃度成為*小抑菌濃度(MIC),一個(gè)特定抗菌藥物的測(cè)試濃度范圍應(yīng)該包含能夠檢測(cè)細(xì)菌的解釋性折點(diǎn)(敏感、中介和耐藥)的濃度,同時(shí)也應(yīng)該包含質(zhì)控參考菌株的MIC.
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
2.1 藥敏片的準(zhǔn)備:購(gòu)買或自制
2.1.1 制備方法:取新華1號(hào)定性濾紙,用打孔機(jī)打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中,瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓消毒后,放在37℃溫箱或烘箱中數(shù)天,使完全干燥。
2.1.2 抗菌藥紙片制作:在上述含有50片紙片的青霉素瓶?jī)?nèi)加入藥液0.25毫升,并翻動(dòng)紙片,使各紙片充分浸透藥液,翻動(dòng)紙片時(shí)不能將紙片搗爛。同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱,放37℃溫箱內(nèi)過(guò)夜,干燥后即密蓋,如有條件可真空干燥。切勿受潮,置陰暗干燥處存放,有效期3-6個(gè)月。
2.2 藥液的制備(用于商品藥的試驗(yàn)):按商品藥的使用治療量的比例配制藥液;如商品藥百病消按其說(shuō)明量治療量0.01%飲水,可按這個(gè)比例配制藥液,可取10毫克加入10毫升的水中混勻。此稀釋液即為用于做藥敏試驗(yàn)的藥液。
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