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伊文思藍染色液（0.5%）

產(chǎn)品簡介： 

    伊文思藍（Evans Blue）又稱偶氮藍，分子式 C34H24N6Na4O14S4，分子量為 960.80，CAS 號為 314-13-6。伊文思藍屬于一種常用的偶氮染料制劑，因其分子量大小與血漿白蛋白相近， 而且在血液中與血漿白蛋白有很高的親和力， 因此在神經(jīng)科學研究中常被用于示蹤觀察血腦屏障（BBB）的完整性，也用于細胞染色區(qū)分活細胞、死細胞，亦可測定血容量。伊文思藍作臨床藥物用于測定血漿和血容量， 也可作動脈插管的定位。 正常情況下血漿白蛋白無法透過血腦屏障， 所以染色后如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障完整， 與血漿白蛋白結(jié)合的依文思藍無法使其著色。相反， 如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障被破壞， 依文思藍就可以進入神經(jīng)系統(tǒng)并使其著色。在熒光波長 470nm、540nm 處有強峰， 680 nm 處有 弱峰�？梢允褂没瘜W透析法和比色法進行檢測。 

    伊文思藍與臺盼藍都是細胞活性染料， 常用于檢測細胞膜的完整性和細胞是否存活。 活

細胞不會被染成藍色，而死細胞會被染成淡藍色。 伊文思藍染色后，通過顯微鏡下直接計數(shù)

或顯微鏡下拍照后計數(shù)，就可以對細胞存活率進行比較精確的定量，其中 0.5%為*常用的

濃度。 活細胞因有外排功能而無法被伊文思藍染色， 因此可以通過此方法在顯微鏡下區(qū)分死

細胞與活細胞，但無法區(qū)分死亡與壞死。 

產(chǎn)品組成： 

自備材料： 

1、 注射器、組織勻漿器 

2、 PBS 

3、 三或丙酮 

操作步驟（僅供參考）： 

（一）血腦屏障通透性 

1、 取處理后的實驗動物（以小鼠為例）， 靜脈注射 Evans Blue Stain （0.5%）數(shù)秒至 1 分鐘內(nèi)，

    小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍色。0.5～1h 后處死小鼠，取目的腦組織。 

2、 腦組織置于 1.5ml 離心管中，加入 1ml PBS， 迅速 用組織勻漿器將腦組織制成勻漿, 

    1000g 離心 15min。 

3、 取上清，加入等量三，4℃孵育 18～24h。該步驟亦可采用如下操作: 取上清，

    按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室溫孵育 24h。 

4、 1000g 離心 20～30 min 或 2000g 離心 15min。 

5、 取上述溶液 1～2ml，用分光光度計測620 nm 處吸光值 （OD 值）。同時測定已知不同梯度     的標準依文思藍的 OD 值，繪制標準曲線。根據(jù)標準曲線計算出待測待測樣品的依文思 

    藍含量。  
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（二）活細胞染色 

1、取 100ml 重懸細胞到常規(guī) 1.5ml 或 0.5ml 離心管內(nèi)，入 100ml Evans Blue Stain 輕輕

   混勻，染色 3min（染色時間可適當延長，但不宜超過 10min）。 

2、吸取少量經(jīng)過染色后的細胞，用血細胞計數(shù)板計數(shù)。通常如果要比較精確地進行定量，

   每個細胞樣品至少數(shù) 500 個細胞，數(shù)出藍色細胞和細胞總數(shù)。細胞存活率計算公式如下: 

   細胞存活率＝（細胞總數(shù)－藍色細胞數(shù)）/細胞總數(shù)´100% 

注意事項： 

1、 Evans Blue Stain 對人體有輕微毒性，請小心防護。 

2、 細胞染色時，注意凋亡小體偶爾也有拒染現(xiàn)象。 

3、 血腦屏障通透性實驗中， Evans Blue Stain注射量應根據(jù)不同動物以及動物的重量調(diào)整。 

4、 采用低溫冷凍離心機進行離心。 

5、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

有效期： 6 月有效。