一、生化試劑盒的測(cè)定原理？
生化試劑盒通過(guò)化學(xué)反應(yīng)/酶促反應(yīng)或物質(zhì)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)測(cè)定樣本中物質(zhì)含量或酶活；所用儀器一般為分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀，兩者的測(cè)定原理都是朗伯比耳定律:A=kbc，即當(dāng)適當(dāng)波長(zhǎng)的一束平行單色光照射固定濃度均勻溶液時(shí)，其吸光度與光通過(guò)的液層厚度成正比。土壤、水質(zhì)、動(dòng)植物組織、血清、細(xì)胞細(xì)菌、食品等樣本均可以進(jìn)行測(cè)定。
二、如何選擇不同規(guī)格的試劑盒？
先根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況選擇，實(shí)驗(yàn)室有酶標(biāo)儀的且有該檢測(cè)波長(zhǎng)的可以選擇微量法試劑盒；實(shí)驗(yàn)室有分光光度計(jì)的，且有相應(yīng)規(guī)格的比色皿既可以選擇常量法也可選擇微量法試劑盒。建議購(gòu)買(mǎi)先閱讀的說(shuō)明書(shū)，對(duì)其中自備的儀器和試劑進(jìn)行確認(rèn)。
三、收到試劑盒后如何保存？
如果收到試劑盒，暫時(shí)不用，可按照外包裝上指示的溫度統(tǒng)一保存；拆開(kāi)包裝后，請(qǐng)按照每個(gè)試劑的保存溫度進(jìn)行保存，有些試劑忌反復(fù)凍融；有些試劑為粉劑，溶解之后性質(zhì)不穩(wěn)定。
四、試劑盒的有效期是多長(zhǎng)？
一般生化試劑盒有效期為6個(gè)月，也有特殊貨號(hào)生化試劑盒有效期為1年；具體以實(shí)際收到貨物的標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。
五、收到試劑盒后應(yīng)該從哪一步做起？
強(qiáng)烈建議客戶先拿出2-3個(gè)預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，先將試劑盒中的說(shuō)明書(shū)通讀一遍，檢查試劑盒中各成分的量與說(shuō)明書(shū)符不符合，溶解或使部分試劑回復(fù)至室溫，然后處理樣本，樣本提取完成后，再溶解一些粉劑，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。
六、買(mǎi)了多個(gè)試劑盒，樣本只有很少可以只用一種提取液提取嗎？
一般同一個(gè)系列的試劑盒中，酶活測(cè)定的提取液類(lèi)似，含量測(cè)定的提取液類(lèi)似。但具體的請(qǐng)具體查詢。
七、待測(cè)樣本必須是鮮樣的嗎？冷凍樣本是否可以用？
新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標(biāo)的測(cè)定，有一些生理活性物質(zhì)容易降解，建議用新鮮樣本測(cè)定，如輔酶Ⅰ、輔酶Ⅱ、谷胱甘肽、線粒體復(fù)合體等。冷凍樣本建議在-70℃或者液氮中保存。一般樣本在4度能都保存一周，-20保存一個(gè)月，-80保存3個(gè)月
八、土壤酶活性測(cè)定可以用鮮土嗎？
由于土壤顆粒大小不一致導(dǎo)致水分含量不一樣，且取樣量較少，為了保/證測(cè)定的重復(fù)性，建議將鮮土風(fēng)干并過(guò)篩后取樣。若用鮮土測(cè)定，需保/證樣本的顆粒大小一致水分含量相似，建議過(guò)40目篩后取樣，且同時(shí)測(cè)定的樣本要保持一致，/好不要一組樣本用風(fēng)干土，一組用鮮土，風(fēng)干后的土樣在-20保存1個(gè)月測(cè)定大部分酶活幾乎不會(huì)有損失；某些土壤的成分如硝態(tài)氮、銨態(tài)氮等在風(fēng)干過(guò)程中會(huì)發(fā)生顯著變化，必須用新鮮樣品進(jìn)行分析。
九、樣本研磨的方法？
樣本研磨我們一般用到三種方法：
1.將研缽置于冰盒上勻漿即冰浴勻漿，在勻漿的過(guò)程中注意勻漿器浸于冰中，防止因?yàn)槟Σ烈鸬臏囟冗^(guò)高，提取液可以在勻漿過(guò)程中或者勻漿后加入。
2.用液氮?jiǎng)驖{，液氮研磨將樣本洗凈，盡量剪成小塊，放入研缽中，加入液氮研磨，液氮揮散后盡快加入第二次液氮直至研磨成粉末狀，避免其過(guò)程中反復(fù)凍融，同時(shí)要做好保護(hù)措施，防止凍傷手指。完成后將粉末收集到離心管中加入緩沖液。樣本可以提稱(chēng)量號(hào)也可研磨完后稱(chēng)量。
3.使用勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿，將稱(chēng)好的組織放入離心管中，加入適量提取液，加入鋼珠。并將模塊提遇冷，按照機(jī)器指示進(jìn)行操作。一般的動(dòng)物組織用該方法效果尚可，有些機(jī)器對(duì)植物組織的處理效果不好。
十、測(cè)定是如何調(diào)零？
使用分光光度計(jì)的用戶，用蒸餾水或相應(yīng)的有機(jī)試劑直接調(diào)零。使用酶標(biāo)儀的用戶，可以在一個(gè)孔里加入200μL的蒸餾水或去離子水，作為調(diào)零孔，也可不用調(diào)零，后續(xù)計(jì)算中會(huì)有空白孔。
十一、樣本如何稀釋或濃縮？
樣本測(cè)定值若超出檢測(cè)范圍，可以將提取的上清液用提取液稀釋后重新測(cè)定。一般從高到低，按照2倍，5倍，10倍，20倍的順序，選擇一個(gè)合適的稀釋倍數(shù)。樣本測(cè)定值若低于檢測(cè)范圍，可以提高樣本濃度，如稱(chēng)取0.2g樣本加入1mL提取液勻漿，相當(dāng)于將樣本濃縮2倍。
十二、如何保/證測(cè)定溫度？
1.根據(jù)說(shuō)明書(shū)中測(cè)定溫度，提打開(kāi)保溫設(shè)備（如水浴鍋），設(shè)到溫度，在達(dá)到溫度后，把冷藏的試劑轉(zhuǎn)移到保溫設(shè)備中保溫10-30分鐘以上，以保/證反應(yīng)一開(kāi)始，就在溫度中進(jìn)行。
2.對(duì)于擁有酶標(biāo)儀的用戶，直接提預(yù)熱，在達(dá)到設(shè)定溫度后，可以直接把預(yù)熱后的試劑，加入酶標(biāo)板，然后開(kāi)始反應(yīng)。
3.在保溫設(shè)備（水浴鍋和金屬浴，/好是者）進(jìn)行。注意提對(duì)保溫設(shè)備進(jìn)行預(yù)熱，達(dá)到設(shè)定溫度后再進(jìn)行反應(yīng)。但是僅適用于能夠終止的反應(yīng)。（4）對(duì)于瞬間完成的反應(yīng)，或者對(duì)溫度不敏感的反應(yīng)，為了提高重復(fù)性，/好在同一溫度下完成檢測(cè)。例如打開(kāi)空調(diào)，設(shè)定在室溫，如25℃。當(dāng)然，所有控溫設(shè)備，都要進(jìn)行預(yù)熱。
十三、試劑盒有哪些常見(jiàn)規(guī)格？
1.50管的試劑盒，常量法試劑盒，用分光光度計(jì)檢測(cè)。1mL的比色皿檢測(cè)。
2.100管的試劑盒，微量法試劑盒，用酶標(biāo)儀（酶標(biāo)板）或者分光光度計(jì)（0.25 mL比色皿）檢測(cè)。
十四、試劑盒規(guī)格中是什么意思？
1.50T/48S：50T指能夠做50次測(cè)定，48S指可以測(cè)試48個(gè)樣品。如果每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次，那么只能測(cè)定16個(gè)樣品。其中有2次測(cè)定用于空白管或者對(duì)照管。值得特別注意的是，50T/24S中由于每個(gè)樣品測(cè)定都需要做對(duì)照，因此能夠測(cè)定樣品的數(shù)量?jī)H為8個(gè)（假設(shè)做3次重復(fù)）
2.100T/96S：100T指能夠做100次測(cè)定，96S指可以測(cè)定96個(gè)樣品，如果每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次，那么只能測(cè)定32個(gè)樣品。其中有4次測(cè)定用于空白管或者對(duì)照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等，通常要比理論測(cè)定次數(shù)少1~3次。其它規(guī)格的含義依次類(lèi)推。值得特別注意的是，100T/48S中由于每個(gè)樣品測(cè)定都需要做對(duì)照，因此能夠測(cè)定樣品的數(shù)量?jī)H為16個(gè)（假設(shè)做3次重復(fù)）。
十五、試劑盒中含有干粉的試劑應(yīng)該怎么稀釋保存？
一般試劑為粉劑的，可能更多的考慮到配成溶液后的穩(wěn)定性差，如NADH，或者和其他試劑溶解在一起會(huì)在不同的溫度下有其他的化學(xué)反應(yīng)。-20℃保存的粉劑建議溶解后分裝保存，避免反復(fù)凍融。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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