1.常規(guī)的PCR反應體系所需試劑①高壓過的超純水(高壓的目的是使其中的 DNase失活,以免降解模板DNA);
②PCR緩沖液(選用與所用聚合酶對應的緩沖液) ；
③4種dNTP混合物(每種dNTP的濃度為2.5mmol/L);
④引物(引物合成后,用超純水稀釋為10mmol/L);
⑤熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(不同廠家、不同批次的酶可能會有差異);
⑥DNA模板(盡量使用純化后的核酸作為模板)。
2.實驗儀器PCR熱循環(huán)儀、核酸電泳儀、凝膠成像設備、離心機等
PCR實驗操作注意事項盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因，樣品間的交叉污染也是原因。因此，不僅要在進行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應該注意：
(1)戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套。
(2)使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染。
(3)避免反應液飛濺，打開反應管時為避免此種情況，開蓋稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面。
(4)操作多份樣品時，制備反應混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應的精/確度。
(5)/后加入反應模板，加入后蓋緊反應管。
(6)操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性。
(7)盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染，/好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器，至少PCR操作過程中加樣器應該用，不能交叉使用，尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū)。
(8)重復實驗，驗證結果，慎下結論。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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