要說做細胞實驗大家擔(dān)心的是什么,那應(yīng)該就是——細胞污染了,而其中支原體污染是細胞培養(yǎng)實驗室重常見、“臭名昭著”的污染。
為什么這么說呢?
這是因為支原體污染幾乎可影響所有細胞生長參數(shù)、代謝及研究的任一數(shù)據(jù),并且,支原體缺乏細胞壁,所以常規(guī)的抗生素并不能對它們起到抵抗作用,而且由于其直徑太小,濾菌器也無法過濾,所以,細胞一旦有支原體污染則十分難以被清除,會給我們的實驗造成大的損失。
研究表明,細胞培養(yǎng)中有15-35%的細胞存在支原體污染,有些地區(qū)甚至高達80%。因此支原體檢測成為了細胞質(zhì)控中不可缺少的環(huán)節(jié),被列入《中國藥典》檢測的范疇。
細胞支原體污染的表現(xiàn):
細胞狀態(tài)變差、生長變慢,在顯微鏡下觀察可能會有小黑點,但培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁。細胞傳代以后就出現(xiàn)細胞間黑點,細胞空泡化,很多類似凋亡、壞死的細胞,終細胞漂浮,完-全死亡。
支原體污染從何而來?
1. 已受污染的細胞;
2. 操作人員的疏失;
3. 已受污染的培養(yǎng)基、血清 ;
4. 操作環(huán)境不良、實驗器具不潔等。
檢測有無支原體污染可做如下檢查:①相差顯微境檢測:將細胞按種于事先放置于培養(yǎng)瓶內(nèi)的蓋玻片上,24h后取出,用相差油鏡觀察,支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。
②熒光染色法:熒光染色用能與DNA特異性結(jié)合的熒光染料Hoechst 33258,可使支原體內(nèi)含有的DNA著色,染色后用熒光顯微鏡觀察,鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點。
③電鏡檢查:用掃描電鏡方法簡便快速,也可以利用透射電鏡。
④DNA分子條文檢查或支原體培養(yǎng)等方法:檢出率高,但方法較為復(fù)雜。
如果檢測到有支原體污染,該如何處理呢?方法1:直接棄之!
這就非常簡單粗暴了,如果還沒做處理,還是趕緊棄之吧,救不如重新復(fù)蘇了,另外對培養(yǎng)箱要做由里至外的清潔處理。
方法2:使用支原體清除培養(yǎng)基
如果你培養(yǎng)的細胞比較珍貴,直接丟棄可惜,那么在確定對細胞的基因及
蛋白表達沒有影響的情況下,可以使用——支原體清除培養(yǎng)基。
遠慕生物支原體清除培養(yǎng)基的優(yōu)勢:1,活性范圍廣:各支原體株系均可作用。
2,安全可靠:工作濃度低,無細胞毒性。
3,使用方便:將支原體去除試劑加入污染培養(yǎng)物即可,操作簡單。
4,時效快:使用的第二天可以明顯看出細胞內(nèi)的小黑點變少,細胞狀態(tài)變好。
原創(chuàng)作者:上海遠慕生物科技有限公司