單克隆
抗體的優(yōu)點與局限性：單克隆抗體和多克隆抗體各有其優(yōu)點和局限性，只有對它們有全/面的了解，才能根據(jù)不同應用域的要求，正確的選擇和應用。
一、單克隆抗體
單克隆抗體的定義:
單克隆抗體是僅與目標蛋白某一特定表位結合的單一抗體。
單克隆抗體的制備：
簡單來說就是將免疫原注射到宿主動物體內產(chǎn)生免疫反應，之后把 B 細胞從脾臟中移出，單種 B 細胞與骨髓瘤細胞融合為 B 細胞雜交瘤，成為一個永生化胞株。這樣一來，雜交瘤的 B 細胞就會一直產(chǎn)出只識別單一表位的單克隆抗體，通常這個胞株會有一個特定的克隆號（clone number），用來與其他胞株區(qū)分。雜交瘤接下來可以被注射到小鼠的腹腔中大量生產(chǎn)，雜交瘤分泌富含抗體的一種液體，被稱作腹水，用注射器抽取純化，就可獲得大量的單克隆抗體。
單克隆抗體更適用于:
1、檢測單一抗原
2、檢測蛋白質家族的單一成員
3、不同實驗/批次的抗體檢測結果穩(wěn)定一致
4、細胞染色背景較低-很適用于 IHC、ICC、IF 等應用
5、量化蛋白質表達 (例：流式或熒光細胞分選)
6、探測分子結構變化
7、探測磷酸化狀態(tài)的變化
8、為 X 射線晶體測試探測目標
9、制作缺少特定細胞類型的動物模型
10、免疫治療
單克隆抗體不建議用于:
1、根據(jù)同源性檢測不同物種的目標蛋白
2、檢測濃度較低的目標蛋白
3、檢測形態(tài)變化了的蛋白
二、多克隆抗體
多克隆抗體定義
多克隆抗體是指與目標蛋白上多種不同表位結合的多種不同抗體.
多克隆抗體制備
多克隆抗體的第1步和單克隆抗體一樣，都是將免疫原注射到宿主體內產(chǎn)生免疫反應，激活了多種B細胞。不同的是免疫過后，多克隆抗體就直接從免疫宿主的血清中分離出來，或接著進行純化，沒有與骨髓瘤細胞融合的過程。一旦宿主動物死亡，需要免疫新的動物，這時血清中的抗體就會有所不同。雖然多抗每批次有輕微差別，但是因為它識別的表位多，這個差別影響并不算太大，而單克隆抗體雖然價格偏高，可是特異性更強更穩(wěn)定�？梢哉f單抗和多抗是各有各的優(yōu)點。
多克隆抗體更適用于:
1、檢測有高同源性的抗原的已知或未知同種型
2、檢測濃度較低的抗原
3、捕獲盡可能多的抗原 (例如 IP 或 ChiP)
4、檢測變性的蛋白
5、檢測可能發(fā)生了糖基化或形態(tài)變化的目標蛋白
6、用多種檢測方法檢測一種原蛋白時
7、檢測 pH 和鹽度不同的溶液中的目標蛋白
多克隆抗體不建議用于:
1、量化檢測，比如：流式。由于不同表位的結合導致信號被放大加強，可能會導致結果不準確
2、當高同源性蛋白的交叉反應會引起問題時
三、多克隆抗體和單克隆抗體的用途
1、定義多克隆抗體和單克隆抗體有用性的兩個關鍵特征涉及它們各自對抗原的特異性和靈敏度。
2、抗體的特異性是由其結合域和目標抗原之間的相對親和力決定的，而其他分子是存在的。對這種特異性的利用對免疫學研究人員和臨床醫(yī)生來說是至關重要的，因為許多應用都是利用多克隆和/或單克隆抗體來門檢測目標分子。結合抗原特異性，抗體的靈敏度是一個重要的參數(shù)，決定了它在實驗室的實用性。
3、高靈敏度的抗體非常適用于診斷應用，如免疫沉淀、West Blot 和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），因為它們能夠識別低水平的目標抗原。
免疫沉淀是一種分析技術，通過使用特異性結合抗原的抗體將抗原從混合物中分離出來。然后用固定化抗體或磁珠對產(chǎn)生的抗原-抗體復合物進行進一步處理，從而使抗原-抗體復合物在分析從混合物中分離出來。
4、與免疫沉淀法一樣，ELISA 可以使用多克隆或單克隆抗體來檢測溶液中的目標抗原。
5、間接和夾心 ELISA 是兩種免疫測定形式，在整個過程中使用兩種類型的抗體：單克隆抗體由于對目標抗原的高特異性，通常先應用（一）；多克隆抗體由于能夠以高靈敏度放大低信號，因此作為二試劑更有用。
6、除了 ELISA，抗體對于免疫組化和流式細胞儀等檢測技術也很有用，因為它們可以以高分辨率檢測復雜組織或細胞內的抗體-抗原構建。
生產(chǎn)企業(yè)對抗體特異性和靈敏度的確認使得像 ELISAs 這樣的免疫測定可以根據(jù)抗原和抗體的使用方式而采取不同的形式，這使得這些測試具有高度的通用性。例如，一種免疫測定需要高度敏感的測試來檢測一種未知的病原體，由于多克隆抗體能夠識別一種抗原上的多個表位，因此會從多克隆抗體中獲益。如果一個病原體或抗原先已經(jīng)被定性，那么在下游應用中使用單克隆抗體來進一步定性可能更合適。
7、在實驗室外，抗體可以被用來增強、模仿或恢復免疫系統(tǒng)攻擊疾病目標的能力。除了一些例外，單克隆抗體比多克隆抗體更適合于治療目的，因為它們具有同質性，對單一表位的高特異性和低程度的交叉反應。
8、這些特性對于有效的癌癥治療特別重要，因為腫瘤細胞能夠逃避或阻斷免疫系統(tǒng)。單克隆抗體療法對癌細胞發(fā)揮作用的一些方式包括涉及直接結合以誘導細胞死亡的機制和阻斷腫瘤生長因子和血液供應的間接機制。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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