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原代細胞可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以內的小分子 RNA 和 DNA，可轉染絕大多數原代細胞。目，無論國外還是國內，原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑。原代細胞能夠高/效轉染絕大多數原代細胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲，也能獲得較為理想的轉染結果。對于大多數原代細胞，RFect PM 細胞轉染陽性率都在 80%以上，而轉染細胞死亡率不到 10%。

原代細胞分離和培養(yǎng)基本步驟

1、器官和組織的選擇

盡可能的去除不必要的組織和血跡。

2、原代細胞的分離

（1）應用PriCells原代細胞分離試劑盒I、II、III。

（2）根據組織來源不同，可選用不同的PriCells原代細胞分離試劑盒。

3、原代細胞的培養(yǎng)：

（1）PriCells原代細胞特制培養(yǎng)基

（2）PriCells原代細胞特制添加物

（3）優(yōu)/質胎牛血清

4、細胞的培養(yǎng)和鑒定：

PriCells原代細胞鑒定試劑盒

4、原代細胞的傳代、保存

（1）傳代：依椐細胞的生長狀態(tài)，生長的細胞1：2或1：3進行傳代。

（2）保存：DMSO＋培養(yǎng)液＋血清

按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘）→冰箱冷凍室（30分鐘）→超低溫冰箱（－80℃過夜）→液氮。

5、原代細胞的復蘇

（1）取出細胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。

（2）吸出細胞懸液，并加10倍以上培養(yǎng)液。

（3）用培養(yǎng)液適當稀釋后接種培養(yǎng)瓶，放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司