懸浮細(xì)胞在炎癥、免疫、凋亡、腫瘤研究等域應(yīng)用廣泛，例如在血液粒細(xì)胞的研究中，THP-1細(xì)胞就是一個(gè)非常經(jīng)典的細(xì)胞模型，在細(xì)胞免疫治療方向，NK92細(xì)胞更是發(fā)揮了必不可少的作用，還有HL-60、K562、U937、U266等都是我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室比較常見(jiàn)的懸浮細(xì)胞。
懸浮細(xì)胞種死亡細(xì)胞形成原因：
在懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中，根據(jù)整體細(xì)胞生長(zhǎng)分裂的狀況可以將整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)周期分為四個(gè)時(shí)期：潛伏期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)/期、穩(wěn)定期、衰亡期。進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)/期的時(shí)候是細(xì)胞分裂旺盛的時(shí)候，細(xì)胞活性也是/高，隨著分裂次數(shù)的增加，細(xì)胞代謝產(chǎn)物增加，細(xì)胞密度增大，到了對(duì)數(shù)生長(zhǎng)/期后期有一小部分細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)凋亡的跡象。
進(jìn)入穩(wěn)定期后細(xì)胞密度達(dá)到/大，如果這個(gè)時(shí)候不及時(shí)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)更換新鮮培養(yǎng)基的話凋亡的細(xì)胞就會(huì)越來(lái)越多，即死細(xì)胞越來(lái)越多。如果死細(xì)胞太多的話會(huì)影響降低整體細(xì)胞活性，同時(shí)也會(huì)抑制影響正常細(xì)胞的生長(zhǎng)代謝。如果涉及藥篩實(shí)驗(yàn)等，死細(xì)胞比例更會(huì)大幅增加。
懸浮細(xì)胞去死細(xì)胞的方法：1.磁珠標(biāo)記
MACS(magnetic-activated cell sorting),原理就是用結(jié)合了磁珠的
抗體去標(biāo)記細(xì)胞，讓目的細(xì)胞帶上磁珠，也可以正向選擇死細(xì)胞，通過(guò)磁場(chǎng)將結(jié)合了磁珠與沒(méi)結(jié)合磁珠的細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)。MACS是細(xì)胞分選的重要手段，優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞活性好，缺點(diǎn)就是能分選的細(xì)胞類(lèi)型有限，且成本較高。
2.流式分選
FACS（fluorescence-activated cell sorting），也就是流式分選，與流式分析一致。利用熒光素標(biāo)記不同的分子，通過(guò)調(diào)節(jié)合適的電壓、補(bǔ)償?shù)�，通過(guò)熒光將目的細(xì)胞與非目的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。
3.活細(xì)胞短暫貼壁法
可以用一種叫Con.A（刀豆球蛋白）來(lái)包被培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，懸浮細(xì)胞中的活細(xì)胞可短暫貼壁，此時(shí)棄去上清，一段時(shí)間后，細(xì)胞又可以重新懸浮。市面上有一些經(jīng)過(guò)特殊處理的養(yǎng)貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)瓶也可達(dá)到這種效果，但是建議使用之根據(jù)所養(yǎng)的懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)狀況測(cè)試一下分離效果。
4.沉降法
部分懸浮細(xì)胞如NK92成團(tuán)生長(zhǎng)，成團(tuán)的細(xì)胞狀態(tài)較好，單個(gè)細(xì)胞基本沒(méi)有增殖能力，根據(jù)這一特性，便可以將細(xì)胞懸液收集在離心管中，注意動(dòng)作要輕柔，不要將細(xì)胞團(tuán)吹散，將離心管直立，觀察離心管底出現(xiàn)“白霧”層時(shí)，可小心將上清去除，來(lái)收獲狀態(tài)良好的細(xì)胞團(tuán)。
5.低速離心法
一般來(lái)說(shuō)，懸浮細(xì)胞中的死細(xì)胞及細(xì)胞碎片的密度相對(duì)較低，此時(shí)，可以通過(guò)低速（500-800rpm）來(lái)去除一些上清中的死細(xì)胞，每次傳代或換液進(jìn)行此操作，使活細(xì)胞有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，可以慢慢提高活細(xì)胞比例。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
客服一
