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技術(shù)文獻

做實驗選擇原代細胞還是細胞株?
閱讀次數(shù):366 發(fā)布時間:2021/11/12 11:28:00
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各種已被命名和經(jīng)過細胞生物學鑒定的細胞系或細胞株,都是一些形態(tài)比較均一、生長增殖比較穩(wěn)定的和生物性狀清楚的細胞群。因此凡符合上述情況的細胞群也可給以相應(yīng)的名稱,即文獻中常稱之為已鑒定的細胞(Certified Cells)。已鑒定的細胞可用于各種實驗研究和生產(chǎn)生物制品,當上已建的各種細胞系(株)已難勝數(shù)。



體外培養(yǎng)細胞的種類和命名

體外培養(yǎng)細胞的名稱,隨培養(yǎng)細胞技術(shù)的發(fā)展和細胞種類的增多而演變。早采用的名稱為細胞株(Cell strain),以后又出現(xiàn)細胞系(Cell Line)一詞,兩者曾一度混用致概念不明確,導致文獻中也很混亂。

名詞的由來

細胞株(cell strain)初為W.Earle(1940)所采用,他把自己建立的小鼠結(jié)締組織L系稱為“株”,1951年,George Gey把其建立的人體宮頸癌細胞Hela系稱為“株”。1954年,White另外使用了“系”來稱呼A Carrel培養(yǎng)的雞胚心臟的細胞群,細胞系(cell line)由此產(chǎn)生,之后這兩個名詞長-期混用。

即使在1979年組織培養(yǎng)協(xié)會業(yè)術(shù)語委員會頒布“業(yè)名詞建議”和1984年在寧波召開的全國動物組織和細胞培養(yǎng)會議通過“動物細胞、組織和器官培養(yǎng)技術(shù)中的一些術(shù)語的譯名和解釋”之后,到目為止國內(nèi)對這兩個名詞的使用仍是混亂的,不僅在商品名中混用,在業(yè)文獻中亦有混用現(xiàn)象。

現(xiàn)將細胞系和細胞株區(qū)分如下:

1、細胞系(Cell Line):原代培養(yǎng)物經(jīng)-次傳代成功即成細胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系(Lineage of Cells)所組成。

2、細胞株(Cell Strain):通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱為有限細胞株(finitecell strain);如果可以連續(xù)傳代,稱為連續(xù)細胞株(continuous cell strain)。對于人類腫瘤細胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

因此,細胞系泛指可傳代的細胞,細胞株是具有特殊性質(zhì)的細胞系。

(一)初代培養(yǎng)

初代培養(yǎng)又稱原代培養(yǎng),即直接從體內(nèi)取出的細胞、組織和器官進行的第1次的培養(yǎng)物。一旦已進行傳代培養(yǎng)(Subculture)的細胞,便不再稱為初代培養(yǎng),而改稱為細胞系。

(二)細胞系

初代培養(yǎng)物開始第1次傳代培養(yǎng)后的細胞,即稱之為細胞系。如細胞系的生存期有限,則稱之為有限細胞系(Finite Cell Line);已獲無限繁殖能力能持續(xù)生存的細胞系,稱連續(xù)細胞系或無限細胞系(Infinite Cell Line)。

無限細胞系大多已發(fā)生異倍化,具異倍體核型,有的可能已成為惡性細胞,因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細胞系。無限細胞系有的只有永生性(或不死性),但仍保留接觸抑制和無異體接種致癌性;有的不僅有永生性,異體接種也有致瘤性,說明已惡性化。

這兩種不同性質(zhì)的無限細胞系,在國內(nèi)外文獻中對這些名詞的應(yīng)用上也常不十分嚴格。為概念上的明確,對有惡性的無限細胞系采用“惡性轉(zhuǎn)化細胞系”一詞表示可能更妥。而對那些只具永生性而無惡性的細胞系,則用無限細胞系或轉(zhuǎn)化細胞系即可。如 NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均屬這類細胞系。

由某一細胞系分離出來的、在性狀上與原細胞系不同的細胞系,稱該細胞系的亞系(Subline)。

(三)克隆細胞株

從一個經(jīng)過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,單細胞增殖形成的細胞群,稱細胞株。再由原細胞株進一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細胞群,亦可稱之為亞株(Substrain)

(四)二倍體細胞

細胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細胞染色體數(shù)相同或基本相同(2n細胞占75%或80%以上)的細胞群,稱二倍體細胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同,而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細胞在正常情況下具有限生命期,故屬有限細胞系。但隨供體年齡和組織細胞的不同,二倍體細胞的壽命長短各異。

人胚肺成纖維細胞可傳50代土10代,人胚腎只有8~10代,人胚神經(jīng)膠質(zhì)細胞15~30代;如從老齡個體取可傳50則細胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細胞系可供研究衰老之用。

為保持二倍體細胞能長-期被利用,一般在初代或2~5代即大量凍存作為原種(Stook Cells),用時再進行繁殖,用后再繼續(xù)凍存,可供長-期使用或延緩細胞的衰老。

做實驗選擇原代細胞還是細胞株?

原代細胞:從體內(nèi)直接分離的細胞。功能、代謝、形態(tài)類似體內(nèi)細胞的特點,因此原代細胞適用于分析單個細胞形態(tài)、代謝、功能。原代細胞的缺點是:細胞均一性差,因為從特定組織取下來的原代細胞可能處于不同的發(fā)育時期。增殖能力差、培養(yǎng)時間受限、轉(zhuǎn)染效率低。

細胞株:原代細胞經(jīng)過長-期培養(yǎng)和篩選后,功能、代謝、形態(tài)趨于均一化的無限增殖細胞。適用于整體水平實驗。優(yōu)點是:容易培養(yǎng)、好感染、干擾因素少、便于同步化、實驗好操作。缺點是:與整體差別大、可能喪失原代細胞的特性,細胞株在長-期傳代過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生變異。所以同一個學名的細胞株,有可能有完-全不同的形態(tài)、代謝、功能表現(xiàn)。不同代數(shù)的細胞株,性質(zhì)也可能完-全不同。

原代細胞由于轉(zhuǎn)染效率低這個問題,應(yīng)用受到了限制。自從腺病毒誕生后,因為其超強的感染能力,克服了原代細胞難感染的問題,使得原代細胞的使用變得更加簡單。由于細胞實驗后,很多時候需要做到動物體內(nèi),由于原代細胞有體內(nèi)細胞的特點,為了細胞實驗和動物體內(nèi)實驗的結(jié)果更加趨向一致性,因此用原代細胞來進行細胞實驗更值得考慮。

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