如何促進(jìn)細(xì)胞貼壁
1. 適度消化細(xì)胞：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長(zhǎng)，一般處理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落，2min足矣，P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。
2. 好用塑料瓶培養(yǎng)，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾膠原包被一下培養(yǎng)瓶，或者用鹽酸對(duì)培養(yǎng)瓶進(jìn)行蝕刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以幫助細(xì)胞貼附新的培養(yǎng)瓶，細(xì)胞不易貼壁，建議加多聚賴氨酸處理。
3. 正確配制消化液或培養(yǎng)液。
4. 使用合適的細(xì)胞外基質(zhì)或貼壁試劑。
5. 復(fù)蘇新的細(xì)胞，DI 一周用20%血清幫助細(xì)胞復(fù)原。
6. 傳代接種一定要鋪的均勻，避免細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)。
7. 細(xì)胞傳代24小時(shí)之內(nèi)，不要晃動(dòng)，以免影響貼壁。
8. 體內(nèi)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)在膠原構(gòu)成的基膜上，因此培養(yǎng)在有膠原的底物上有利于生長(zhǎng)。人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)，可以用γ射線照射后的3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層，另外降低pH、Ca2+含量和溫度，均有利于上皮細(xì)胞生長(zhǎng)。
細(xì)胞培育的關(guān)鍵
一、萬(wàn)物的成長(zhǎng)離不開(kāi)水，細(xì)胞也是相同的，若要它成長(zhǎng)，有必要要用新鮮的雙蒸水，不含任何雜質(zhì)和有離子等成分。
二、PBS（也可用BBS、如：Hanks D-Hanks液裝備）-此產(chǎn)品主要用于免疫組化染色時(shí)安排或細(xì)胞的漂洗。Sciencell的DPBS（SicenCell No.0303）是一種無(wú)毒、無(wú)滲合物的緩沖液，它不包括Ca2 +, Mg2 和酚紅而且經(jīng)過(guò)0.2μm過(guò)濾消毒，可用于沖刷細(xì)胞而不會(huì)造成損害。
三、胰
蛋白酶的效果是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的安排或許細(xì)胞對(duì)胰酶的效果反響不相同，胰酶渙散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和效果時(shí)刻有關(guān)，在PH值為8.0，溫度為37度時(shí)，胰酶溶液的效果才能qiang。所以使用胰酶時(shí)。應(yīng)當(dāng)掌握好時(shí)刻，濃度和溫度。
四、內(nèi)皮細(xì)胞觸及多個(gè)血管生物學(xué)的范疇，是很多科研研究的熱門，它不僅能完結(jié)血漿和安排液的代謝交流，而且能合成和排泄多種生物活性物質(zhì)，以確保血管正常的縮短和舒張，起到維持血管張力，調(diào)節(jié)血壓以及凝血與抗凝平衡等特殊功能，從而堅(jiān)持血液的正常流動(dòng)和血管的長(zhǎng)時(shí)間通暢。
五、 原代細(xì)胞凍存很關(guān)鍵 ，由于一不留神就會(huì)復(fù)蘇不活 ，一凍回到解放，DMSO是常用的凍存細(xì)胞的試劑，但是由于其具有揮發(fā)性，毒性，不好掌控，而導(dǎo)致很多科研者在細(xì)胞凍存之后自我感覺(jué)凍存沒(méi)有問(wèn)題，但是復(fù)蘇起來(lái)卻一個(gè)活細(xì)胞也見(jiàn)不著。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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