設備用具:切片機、恒溫箱、溶蠟箱、玻璃缸、載玻片、蓋玻片、手術(shù)刀片、鑷子、包埋盒。
試 劑 :10%福爾馬林、酒精、二甲-苯、固體石蠟、蘇木-精、酸水、氨-水、酒精伊紅染色劑型、加-拿大樹膠
(二)HE染色石蠟切片的制作過程
步驟一:取材與固定:
取動物新鮮組織塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液)使組織、細胞的
蛋白質(zhì)變性凝固,以防止細胞死后的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
步驟二:脫水透明:
一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲-苯中透明,以二甲-苯替換出組織塊的中酒精,才能浸蠟包埋。
步驟三:浸蠟包埋:
將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中,放入溶蠟箱保溫。待石蠟完-全浸入組織塊后進行包埋:先制備好容器(如折疊一小紙盒),倒入已溶化的石蠟,迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬,才能在切片機上切成很薄的切片。
步驟四:切片與貼片:
將包埋好的蠟塊固定于切片機上,切成薄片,一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折,要放到加熱的水中燙平,再貼到載玻片上,放45℃恒溫箱中烘干。
步驟五:脫蠟
常用HE染色,以增加組織細胞結(jié)構(gòu)各部分的色彩差異,利于觀察。蘇木-精(Hematoxylin,H)是一種堿性染料,可將細胞核和細胞內(nèi)核糖體染成藍紫色,被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿性。伊紅(Eosin,E)是一種酸性染料,能將細胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸性。染色,須用二甲-苯脫去切片中的石蠟,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,蕞后入蒸餾水,就可染色。
步驟六:染色
HE染色過程是:
①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木-精水溶液中染色數(shù)分鐘。
②酸水及氨-水中分色,各數(shù)鐘。
③流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻。
④入70%和90%酒精中脫水各10分鐘。
⑤入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘。
步驟七:脫水透明:
染色后的切片經(jīng)純酒精脫水,再經(jīng)二甲-苯使切片透明。
步驟八:封固:
將已透明的切片滴上加-拿大樹膠,蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后,貼上標箋,切片標本就可使用。
原創(chuàng)作者:上海遠慕生物科技有限公司