細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法主要包括：電穿孔法、磷酸鈣沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染等，理想的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法是具有高轉(zhuǎn)染效率、對細(xì)胞的毒性作用小等，本文主要介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用的方法-脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的原理和操作步驟等。
一、脂質(zhì)體（Liposome）轉(zhuǎn)染方法原理
脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。
優(yōu)點:與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復(fù)性，它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目條件下蕞方便的轉(zhuǎn)染方法。
二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染操作步驟
（1）細(xì)胞培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
（2） 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液（為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量）
A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。
（3）吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
（4）轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
（5）轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
（6）瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞
蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達(dá)效率。
注意：轉(zhuǎn)染時切勿加血清，血清對轉(zhuǎn)染效率有很大影響。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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