支原體又稱霉形體，是很小的原核細(xì)胞，完全沒有細(xì)胞壁．菌體形態(tài)多變，具高度多形性，球形、梨形、分枝的或螺旋的絲狀等。營養(yǎng)要求苛刻，在高血清量的復(fù)雜培養(yǎng)基上生長，在固體培養(yǎng)基上菌落呈油煎荷包蛋樣特征性外觀。
培養(yǎng)基：牛心湯復(fù)合培養(yǎng)基等。
分離培養(yǎng)：無菌采取肺、肝、脾、腎組織，直接剪成小塊放在固體培養(yǎng)基上劃直線，再用無菌鉑耳環(huán)在與其垂直方向劃線，或者將組織塊剪碎磨成勻槳，經(jīng)液體培養(yǎng)基連續(xù)系列稀釋后培養(yǎng)．若當(dāng)液體材料為牛乳、排泄物、胎液等，可直接取0.2ML接種于液體培養(yǎng)基或取0.1ML接種于固體培養(yǎng)基。固體瓊脂平板置37攝氏度潮濕需氧條件或在５％二氧化碳下培養(yǎng)48-96h,用斜射光或放大25-40倍的立體顯微鏡檢查,若有特異菌落出現(xiàn),應(yīng)選取散在的單個菌落用無菌解剖刀切下小瓊脂塊,用巴氏吸管小心地將菌落和周圍瓊脂吸入,再將其移入盛有2-3ML的液體肉湯培養(yǎng)管培養(yǎng)48h,將其培養(yǎng)物通過0.45微升孔徑大小的濾膜過濾后作1:10和1:100稀釋,每個稀釋液取0.05ML涂布于幾個瓊脂平板,即可得到純的支原體培養(yǎng)物。
牛心湯復(fù)合培養(yǎng)基：
牛心湯1000ml
蛋白胨10g
氯化鈉5ml
酵母提取液10ml
無菌馬血清200ml
青霉素200IU/ml
實驗之MP肺炎支原體培養(yǎng)實驗方法：
、標(biāo)本采集
支原體常侵及人和動物的粘膜表面，般可用棉花拭子涂抹取樣后放入2~3ml支原體液體培養(yǎng)基的小管中，或取其分泌液，若標(biāo)本是組織塊，可在滅菌乳缽或玻璃勻漿后接種，取樣后應(yīng)盡快接種培養(yǎng)。
二、分離培養(yǎng)
1、支原體固體培養(yǎng)基接種法轉(zhuǎn)動拭子將標(biāo)本液體盡量擠出，用無菌滴管吸1~2滴接種在平皿上蓋好，用L棒涂抹或傾斜轉(zhuǎn)動平皿使標(biāo)本均勻分布，置37℃孵育。
2、支原體半固體培養(yǎng)基接種法混種法：在制備半固體培養(yǎng)基時，培養(yǎng)基加熱溶化，溫度降至50℃時，添加動物血清、酵母浸液及青霉素后混勻，待冷卻至37~40℃時，用無菌滴管吸取標(biāo)本0.5~1ml加入培養(yǎng)基中，充分混勻，凝固后置37℃孵育。
3、穿刺接種法：方法同細(xì)菌接種法。
三、結(jié)果觀察
絕大多數(shù)支原體為兼性厭氧，少數(shù)在含10%CO2和相對濕度80~90%的大氣環(huán)境中生長良好。支原體生長緩慢，多數(shù)于3~4d長出菌落，少數(shù)于1~2w方長出典型菌落，在平皿固體培養(yǎng)基上生長的菌落呈"油煎蛋"狀，邊緣不整齊。
四、附錄
糖酵解培養(yǎng)基（肺炎支原體培養(yǎng)基）
基礎(chǔ)培養(yǎng)基70ml
馬（或牛血清）20ml
25%酵母浸液10ml
0.4%酚紅0.5ml
青霉素10000IU/ml5.0ml
調(diào)pH7.8
肺炎支原體培養(yǎng)很簡單的，特別是液體培養(yǎng)，不需要防護(hù)！
配方上面的有點復(fù)雜而模糊，簡單：
PPLO21g（商品化買）
酵母粉6g
馬血清200ml（沒有的話用小牛血清代替）
L－半胱氨酸0.3g
葡萄糖10g
1%酚紅4ml
AMP若干（0.1－0.2g，多加點不影響）
有時還加SMZ和TMP！
ph要調(diào)的，大概在7.5－7.6之間吧！
酚紅可以高壓的！
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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