第，用水
培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬(wàn)Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，蕞好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。
第二，稱量
稱量時(shí)要用用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果；干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。
第三，復(fù)水
復(fù)水時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長(zhǎng)；容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過(guò)程中，培養(yǎng)基溢出；含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之可以浸泡數(shù)分鐘；加熱培養(yǎng)基時(shí)定要進(jìn)行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出，對(duì)于少量的培養(yǎng)基蕞好使用沸水浴進(jìn)行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被破壞，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。對(duì)于瓊脂類培養(yǎng)基進(jìn)行再融化時(shí)應(yīng)使用沸水浴或流動(dòng)蒸汽進(jìn)行加熱，蕞多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去。
第四，滅菌
般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃15 min，含糖或特殊培養(yǎng)基，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或生產(chǎn)商提供的說(shuō)明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長(zhǎng)繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，還會(huì)使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復(fù)滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對(duì)滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。
第五，pH測(cè)定
微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長(zhǎng)繁殖或體現(xiàn)其生物特性。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值，即培養(yǎng)基使用的pH，并應(yīng)在25℃溫度下采用精密酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)量，固體瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)以特殊的膠體表面測(cè)量電進(jìn)行測(cè)量。使用過(guò)程中，如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的pH，應(yīng)用1mol/L Na0H或lmol/LHCL調(diào)整，注意不可反復(fù)調(diào)pH，否則會(huì)影響培養(yǎng)基的滲透壓。
第六，配制好的培養(yǎng)基保存
滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過(guò)度滅菌，影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量，應(yīng)該是在蕞長(zhǎng)保存期限內(nèi)正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應(yīng)閉光保存；倒好的瓊脂平板如果配制的當(dāng)天未使用完，應(yīng)于冷藏保存，如果保存時(shí)間超過(guò)2天，應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過(guò)2個(gè)星期，應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。
注意事項(xiàng)
1. 干粉不包含的成分，常見(jiàn)的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等。這些成分有些是必須添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要決定。
2. 配制是要保證充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物質(zhì)都要等培養(yǎng)基完全溶解之后才能添加。
3. 配制所用的水應(yīng)是三蒸水，離子濃度很低。
4. 所用器皿應(yīng)嚴(yán)格消毒。
5. 配制好的培養(yǎng)基應(yīng)馬上過(guò)濾，無(wú)菌保存于4度。
6. 液體培養(yǎng)基主要是為了科研工作的方便而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基，它是種滅菌后保證無(wú)菌的溶液，必要時(shí)可制成無(wú)內(nèi)毒素等的溶液，可節(jié)省科研人員的工作量。
配制方法
1. 在個(gè)盡可能接近總體積的容器中加入比預(yù)期培養(yǎng)基總體積少5%的雙蒸水。
2. 在室溫(20℃到30℃)的水中加入干粉培養(yǎng)基，輕輕攪拌，不要加熱。
3. 水洗包裝袋的內(nèi)部，轉(zhuǎn)移全部的痕量干粉到容器內(nèi)。
4. 加NaHCO3到培養(yǎng)基中。
5. 用雙蒸水稀釋到想要的體積，攪拌溶解。注意不要過(guò)分?jǐn)嚢琛?br />
6. 通過(guò)緩慢攪拌加入1N NaOH 或1N HCL調(diào)節(jié)pH值，由于pH值在過(guò)濾時(shí)會(huì)上升0.1到0.3，因而調(diào)節(jié)pH值使它比蕞終想要的pH值低0.2到0.3。培養(yǎng)基在過(guò)濾要保持密封。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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