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技術(shù)文獻(xiàn)

PCR實(shí)驗(yàn)室污染核酸假陽性問題如何處理?
閱讀次數(shù):681 發(fā)布時(shí)間:2021/3/30 10:21:44
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為避免結(jié)果假陰性、假陽性以及出現(xiàn)誤差,需要實(shí)驗(yàn)室人員及時(shí)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室存在的不足并加以改正,這樣才能為臨床的進(jìn)步治療提供精準(zhǔn)的數(shù)據(jù)。

產(chǎn)生污染主要有以下4個(gè)原因:

①是PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。這也是常見的污染原因。PCR產(chǎn)物經(jīng)反復(fù)多次的擴(kuò)增,其復(fù)制量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過PCR的檢測限,所以即使是微量的污染也足以造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽性。

②試劑的污染。在試劑的配制過程中,接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導(dǎo)致試劑被污染。

③待測樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴(yán)導(dǎo)致樣品與外界接觸被污染;其次在核酸提取過程中使用了被污染的移液器或槍頭導(dǎo)致樣品被污染;另外,某些樣品中含有病毒,若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。

④氣溶膠污染。若氣溶膠中包含病毒等污染物擴(kuò)散至空氣中有可能造成PCR產(chǎn)物污染。氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產(chǎn)生的,開蓋、晃動(dòng)反應(yīng)管及污染加樣器的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠從而導(dǎo)致交叉污染。據(jù)計(jì)算個(gè)氣溶膠顆?珊48 000 拷貝,因此,應(yīng)尤其重視由氣溶膠導(dǎo)致污染的問題。PCR 實(shí)驗(yàn)室只要出現(xiàn)了污染,之的結(jié)果報(bào)告就變?yōu)闊o效而且也無法進(jìn)行其他的實(shí)驗(yàn)操作。必須找出并徹底清除污染源,才能得到準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

為了提高實(shí)驗(yàn)室的檢測質(zhì)量,避免實(shí)驗(yàn)室污染以及確保實(shí)驗(yàn)室的生物安全,規(guī)范有效的管理是實(shí)現(xiàn)這切的根本措施。但有時(shí)會(huì)出現(xiàn)管理不到位甚至是疏忽的地方,比如隨意出入實(shí)驗(yàn)室,甚至逆行;沒有按照規(guī)范穿戴口罩、鞋套;試驗(yàn)期間緩沖間兩側(cè)門同時(shí)打開;實(shí)驗(yàn)完畢后忘記開紫外燈消毒等。這些不規(guī)范的行為為實(shí)驗(yàn)室的安全和污染埋下了隱患,從而影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,有效的管理和實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程的規(guī)范執(zhí)行尤為重要。

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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