實(shí)驗(yàn)室次用不完的血清會(huì)采取繼續(xù)冷凍的方式保存，凍融血清會(huì)對(duì)
蛋白的活性有影響，如果是反復(fù)凍融的確會(huì)影響到細(xì)胞正常生長。
曾有研究發(fā)現(xiàn)，血清凍融三次，對(duì)腫瘤標(biāo)志物的濃度影響不大1，對(duì)于血漿，有報(bào)道在短時(shí)間內(nèi)反復(fù)凍融三次，對(duì)總蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影響不大，但作者推測對(duì)免疫球蛋白的活性有影響2。重要的是篇西北民族學(xué)院的文章，《反復(fù)凍融新生牛血清對(duì)促細(xì)胞生長效應(yīng)的影響》，作者針對(duì)SP2/0細(xì)胞，用MEM培養(yǎng)基和三批新生牛血清進(jìn)行培養(yǎng)。血清分別凍融4次至28次不等。然后繪制細(xì)胞生長曲線，根據(jù)公式t =T/A , A=log2Y/X計(jì)算細(xì)胞倍增時(shí)間（t為細(xì)胞倍增時(shí)間，Y為細(xì)胞峰值1 d的細(xì)胞數(shù)，X為接種細(xì)胞數(shù)，T為細(xì)胞生長時(shí)間）。結(jié)果顯示：選用的三批新生牛血清在反復(fù)凍融28次時(shí)， 血清促細(xì)胞生長的大增殖量變化不大，均高于1×106/mL,但是血清促細(xì)胞生長的倍增時(shí)間在反復(fù)凍融20次時(shí)延長， 即血清促細(xì)胞繁殖代所需的時(shí)間在凍融次數(shù)達(dá)到20次時(shí)顯著增加。筆者觀察了下該文章的結(jié)果列表，發(fā)現(xiàn)在凍融20次之，細(xì)胞倍增時(shí)間延長2-3小時(shí)不等，20次時(shí)，則延長3-4小時(shí)。可見，影響還是比較顯著的。該文章的局限是針對(duì)新生牛血清，而沒有對(duì)胎牛血清進(jìn)行測試。
國外有人對(duì)大鼠血清中的18種化學(xué)成分進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)反復(fù)凍融3次對(duì)其中的14種成分沒有顯著影響，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，膽紅素，甚至包括氯離子有些明顯變化，但其濃度變化控制在10%以內(nèi)。3總而言之，如果能避免牛血清的反復(fù)凍融，及時(shí)分裝，那是理想的。如果在短時(shí)間內(nèi)有幾次反復(fù)凍融，也不必過于擔(dān)心。但是，對(duì)于胎牛血清，還有個(gè)問題，是反復(fù)凍融增高了血清產(chǎn)生沉淀或渾濁的風(fēng)險(xiǎn)。因?yàn)檠逶谌诨瘯r(shí)，冰塊和蛋白融化的速度是不樣的，局部可能因蛋白濃度過高而產(chǎn)生沉淀。同時(shí)，如果血清內(nèi)含有少量纖維蛋白原，那么在低溫下也可以形成絮狀沉淀4，等到血清再融化時(shí)，沉淀就顯現(xiàn)出來了。所以，血清的質(zhì)量也非常重要。
因此對(duì)血清反復(fù)凍融對(duì)細(xì)胞是有危害的建議如果幾次使用不完應(yīng)盡量分裝使用。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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