色譜又稱色層法或?qū)游龇�，是種物理化學分析方法，它利用不同溶質(zhì)(樣品)與固定相和流動相之間的作用力(分配、吸附、離子交換等)的差別，當兩相做相對移動時，各溶質(zhì)在兩相間進行多次平衡，使各溶質(zhì)達到相互分離。
01柱色譜
為向玻璃管中填入固定相，以流動相溶劑浸潤后在上方倒入待分離的
溶液，再滴加流動相，因為待分離物質(zhì)對固定相的吸附力不同，吸附力大的固著不動或移動緩慢，吸附力小的被流動相溶劑洗下來隨流動相向下流動，從而實現(xiàn)分離。
02紙色譜
以濾紙條為固定相，在紙條上點上待分離的混合溶液的樣點，將紙條下端浸入流動相溶劑中懸掛，溶劑因為毛細作用沿濾紙條上升，樣點中的溶質(zhì)從而被分離。
03薄層色譜
是在玻璃板上涂以固定相涂層，然后點樣，下端浸入溶劑，同樣自下而上分離。常用于探索柱色譜實驗條件，溶劑和固定相的選擇等。
常用固定相有石膏、氧化鋁、蔗糖、淀粉等，常用流動相為水、苯等各種有機溶劑。
影響色譜柱使用壽命的主要因素
流動相因素
1.流動相pH
不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍。常溫下無定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg·L-1，且在pH1～9的范圍內(nèi)溶解的硅膠量幾乎是常量，考慮到溶解速度的影響,對于硅膠基質(zhì)的填料,其所能承受的流動相pH范圍約為1～8。
鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用,使填料對流動相的適應范圍大大增加，如現(xiàn)在廣泛使用的反相色譜填料C18(十八烷基硅烷鍵合硅膠)，其pH適用范圍可達2～10。當流動相pH值超出酸性范圍時，鍵合相易發(fā)生水解而流失；當流動相pH超出堿性范圍時，會加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子，這兩種反應均是不可逆反應，特別是在溫度較高（>40℃）的環(huán)境下，會使柱效迅速降低而報廢。
2.流動相變質(zhì)
當使用為廣泛的是硅基鍵合相填料，當以水溶液作為流動相或流動相中含有定濃度的磷酸鹽緩沖液時，水溶液中或緩沖鹽溶液中會滋生出些細菌或霉菌，從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對于多元自動比例混合的高效
液相色譜儀來說,水相或緩沖鹽相獨立存貯，因存放時間較長而容易發(fā)生此類問題。
3.流動相純度
目，廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會有大量的流動相通過,如流動相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機械性堵塞,引起柱壓升高而無法正常使用。
4.其它因素
如，流動相的性對柱子也有定影響，甲醇、水、冰醋酸等性較大的物質(zhì)會破壞硅膠填料柱，正丁醇、二氯甲烷等性小的物質(zhì)會破壞化學鍵合硅膠柱，堿性溶液會破壞陽離子交換樹脂色譜柱,酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。
樣品因素
1.樣品的溶解性
樣品試樣在配制中，如有少量微粒未能完全溶解，則會隨試樣起進入色譜柱，同樣，會沉積在柱頭處，造成色譜柱的堵塞。
2.樣品的純度
樣品中可能含有待分析組分以外的各種組分或雜質(zhì)，這些組分或雜質(zhì)可能會在柱內(nèi)產(chǎn)生不可逆吸附，從而，使固定相的活性點被覆蓋，保留特性發(fā)生變化。
3.樣品的化學性質(zhì)
待測試樣中的各種組分與填料之間應具有化學穩(wěn)定性，比較典型的是在使用氨基鍵合柱時，應避免使用含羰基的化合物和流動相，如，丙酮、乙酸乙酯等，以免固定相中的NH2和酐、酮發(fā)發(fā)希夫(Schiff)縮合而使固定相破壞。
其它因素
影響色譜柱壽命的因素很多，除流動相和樣品因素外，還有其它些外在因素，如，柱壓的影響，溫度的影響，色譜柱的正確沖洗，色譜柱的正確安裝等。
色譜柱出現(xiàn)問題的解決辦法
色譜柱在使用中常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正�，F(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），以下列舉了部分常見原因及解決辦法：
1.色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染。
解決方法：如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
2.色譜柱頭的填料被樣品污染。
解決方法：如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。
3.色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結(jié)晶析出。
解決方法：如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
4.流動相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。
解決方法：如果因pH值使用不當，很難恢復。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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