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技術(shù)文獻

MS培養(yǎng)基配方及其特點 遠慕新聞√
閱讀次數(shù):482 發(fā)布時間:2020/12/9 10:04:02
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植物組織培養(yǎng)概念(廣義)又叫離體培養(yǎng),指從植物體分離出符合需要的組織、器官或細胞,原生質(zhì)體等,通過無菌操作在人工控制條件下進行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟價值的其他產(chǎn)品的技術(shù)。

植物組織培養(yǎng)概念(狹義)指用植物各部分組織,如形成層、薄壁組織、葉肉組織、胚乳等進行培養(yǎng)獲得再生植株,也指在培養(yǎng)過程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng),愈傷組織再經(jīng)過再分化形成再生植物。

MS培養(yǎng)基(Murashige and Skoog medium)是植物組織培養(yǎng)中*常見的培養(yǎng)基。很多植物的細胞、組織和器官在MS培養(yǎng)基上表現(xiàn)良好的生長和發(fā)育。1/2MS培養(yǎng)基,即MS培養(yǎng)基無機鹽濃度減半,也被廣泛采用。

1962年7月,Toshio Murashige 和Folke Skoog在 Physiologia Plantarum雜志發(fā)表了標(biāo)題為A Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures的研究論文,其中提出了MS培養(yǎng)基的配方。

MS培養(yǎng)基淵源

Toshio Murashige作為Folke Skoog教授的博士生以煙草髓質(zhì)(pith)和愈傷組織培養(yǎng)體系來尋找新的植物激素(organic growth factors)。Toshio Murashige在White培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,研究了氮磷鉀等十幾種元素在不同濃度下對煙草愈傷組織生長量的影響,通過繪制元素濃度——生物量曲線找到了上述元素的適宜濃度。

這些實驗發(fā)現(xiàn),提升氮和鉀的濃度對煙草愈傷組織生物量的增加*為有效。

MS培養(yǎng)基的特點是無機鹽的濃度特別高,在常見的植物培養(yǎng)基中是的。

MS培養(yǎng)基中的氮元素含量特別高,達到了B5培養(yǎng)基的2.3倍,WPM培養(yǎng)基的4.8倍和White培養(yǎng)基的30倍。這也是有些植物的組織在MS培養(yǎng)基上生長發(fā)育受阻的原因,通?梢酝ㄟ^降低濃度來得到改善。

與生長良好的植物的平均元素組成相比,MS培養(yǎng)基中氮和鉀元素是足夠的,而磷、鈣和鎂的含量明顯較低。

每種植物的元素組成都有其特點,根據(jù)這些特點調(diào)整培養(yǎng)基的配方可以提升離體培養(yǎng)的效果。

培養(yǎng)基的配制

配制培養(yǎng)基有兩種方法可以選擇,一是購買培養(yǎng)基中所有化學(xué)藥品,按照需要自己配制;二是購買商品的混合好的培養(yǎng)基基本成分粉劑,如MS、B5等。自己配制可以節(jié)約費用,但浪費時間、人力、且有時由于藥品的質(zhì)量問題,給實驗帶來麻煩。就目前國內(nèi)的情況看,大部分還是自己配制。

1、配制幾種母液

一般配制成100倍MS有機母液。配成1L母液,倒入1L試劑瓶中,存放于冰箱中。

1.1配制MS大量元素母液

1.2配制MS微量元素母液

1.3配制MS有機母液

1.4配制MS鐵鹽母液

MS母液有5種大量元素母液,加上MS微量元素母液、MS有機母液和MS鐵鹽母液,共8種母液。

2、激素母液的配制

各種生長素和細胞分裂素要單獨配制,不能混合在一起,生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當(dāng)量的NaOH溶解,細胞分裂素一般要先用1當(dāng)量的鹽酸溶解,然后再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。

3、配制培養(yǎng)基

以配置1L MS培養(yǎng)基為例,按順序進行如下操作:

3.1先在燒杯中放入一些蒸餾水。

3.2分別取上面八種母液10ml倒入。

3.3一般稱取30g蔗糖倒入,攪拌溶解。

3.4加蒸餾水用量筒定溶至1L。

3.5按設(shè)計好的方案添加各種激素,由于激素的用量很小,而且激素對組培植物的生長至關(guān)重要。所以有條件的話用微量可調(diào)移液器吸取,減少誤差。

3.6用精密試紙或酸度計調(diào)整PH至5.7~5.8。(有條件的話使用酸度計,比較精確) 可配1當(dāng)量的HCL和1當(dāng)量的NaOH用來調(diào)溶液PH值。

1當(dāng)量HCL配制:用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。

1當(dāng)量NaOH配制:稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。

3.7稱取5g左右瓊脂粉(質(zhì)量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在電爐上加熱至沸騰,直到瓊脂粉熔化。

3.8稍微冷卻后,分裝入培養(yǎng)容器中。無蓋的培養(yǎng)容器要用封口膜或牛皮紙封口,用橡皮筋或繩子扎緊。

3.9放入消毒滅菌鍋滅菌,滅菌20分鐘左右。

3.10滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基,平放在實驗臺上令其冷卻凝固。

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