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原代細(xì)胞不貼壁的原因與解決辦法
閱讀次數(shù):201 發(fā)布時(shí)間:2023/5/11 9:43:22
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大多數(shù)原代貼壁細(xì)胞貼壁時(shí)間是6h到12h,細(xì)胞不貼壁有好多種原因的
1、如果你用玻璃培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的話,有可能你的瓶子沒處理好;建議你用一次性培養(yǎng)瓶,進(jìn)口的都可以。
2、一般做原代細(xì)胞貼壁培養(yǎng)用胰酶消化,消化的程度要掌握好,如果消化時(shí)間不到、分散不均勻不貼壁。一般消化有熱消化,就是放在37度里消化,時(shí)間比較短不好控制,傳代培養(yǎng)常用。還有就是冷消化放在4度里,一般在幾個(gè)小時(shí)以上,胰酶濃度也有要求的,一般都用0.125-0.25%之間。ph在7.6左右。
3、還有就是天然培養(yǎng)基的選擇,就是血清種類,血清能夠使細(xì)胞貼壁,并且提供細(xì)胞生長(zhǎng)的重要營(yíng)養(yǎng)成分。

細(xì)胞培養(yǎng)中的不貼壁及分化的解決辦法

如果細(xì)胞呈現(xiàn)不貼壁現(xiàn)象,且細(xì)胞根本就不能錨定的解決辦法:
1、可以在鋪有瓊脂和瓊脂糖的培養(yǎng)皿上克隆細(xì)胞,也可在襯有瓊脂的甲基纖維素的非組織培養(yǎng)用平皿制備細(xì)胞克隆。
2、在這些支持物中應(yīng)適當(dāng)添加生長(zhǎng)因子及添加物。3、如使用組織培養(yǎng)用平皿克隆細(xì)胞,應(yīng)在灌制瓊脂等支持物鋪加飼養(yǎng)層。

如果細(xì)胞呈現(xiàn)不貼壁現(xiàn)象,但細(xì)胞能夠錨定但貼壁不佳的解決辦法:
使用鋪加了甲基纖維素的組織培養(yǎng)用用培養(yǎng)皿進(jìn)行細(xì)胞克隆。

細(xì)胞培養(yǎng)如果細(xì)胞不發(fā)生分化,解決辦法如下: 
1、更換能夠誘導(dǎo)細(xì)胞分化的培養(yǎng)條件。 
2、在細(xì)胞分離和傳代中使用選擇性培養(yǎng)基。

細(xì)胞培養(yǎng)中如果所養(yǎng)細(xì)胞喪失產(chǎn)物形成能力,解決辦法如下: 
1、采用PCR及Northern雜交方法,檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá)能力。 
2、采用PCR及Northern雜交方法檢測(cè)報(bào)告基因和方案。 
3、使用分化誘導(dǎo)條件。 
4、在細(xì)胞分離和傳代過程中針對(duì)特定細(xì)胞使用相應(yīng)的選擇培養(yǎng)基。
 

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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