活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)總結(jié)，必看！_技術(shù)文章

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活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)總結(jié)，必看！
閱讀次數(shù)：407 發(fā)布時(shí)間：2020/10/27 9:46:15

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近年來，活細(xì)胞成像活躍于生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。在它的加持下，研究者們可以實(shí)時(shí)或者在一段時(shí)間內(nèi)觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和細(xì)胞生理過程，從而加深對(duì)細(xì)胞運(yùn)作過程的認(rèn)識(shí)。但在各種實(shí)驗(yàn)操作和成像條件下，想要成功做好活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)并不容易。

1、實(shí)驗(yàn)前我們先了解一下，什么是活細(xì)胞成像，它有哪些作用？

通常，我們把使用延時(shí)成像技術(shù)開展活細(xì)胞研究簡(jiǎn)稱為「活細(xì)胞成像」。通過活細(xì)胞成像技術(shù)，可以研究靶標(biāo)參與的動(dòng)態(tài)生命過程，酶活性、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白與受體轉(zhuǎn)運(yùn)以及膜的再循環(huán)過程（內(nèi)吞與胞吐）等動(dòng)態(tài)進(jìn)程都可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。

2、我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中又應(yīng)該注意些什么？

眾所周知，活細(xì)胞需保持在天然的生理?xiàng)l件范圍內(nèi)，包括 pH、溫度、O 2 水平和滲透壓等等，維持細(xì)胞的健康和功能活性十分重要。

所以，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作過程中需特別注意：

須通過特定方法實(shí)現(xiàn)以*小毒性標(biāo)記靶標(biāo)——無論是靶分子、細(xì)胞功能還是細(xì)胞狀態(tài)；

活細(xì)胞通常很難允許某些大的檢測(cè)分子通過；

移動(dòng)的觀察目標(biāo)更難保持聚焦；

使用的檢測(cè)技術(shù)是否對(duì)活細(xì)胞有損傷。

當(dāng)然，隨著實(shí)驗(yàn)需求不斷變化，需要注意的點(diǎn)也會(huì)有所不同。

舉例來說，研究細(xì)胞生長(zhǎng)與細(xì)胞分裂的實(shí)驗(yàn)可能與研究受體激活等實(shí)驗(yàn)就具有明顯不同的需求。

一些強(qiáng)健的永生化細(xì)胞系能在無專門環(huán)境控制的條件下忍受短時(shí)成像；

在某些短時(shí)成像實(shí)驗(yàn)中，使用較大的培養(yǎng)基體積可避免由于揮發(fā)所導(dǎo)致的滲透壓和含氧量變化問題；

而對(duì)于長(zhǎng)時(shí)成像研究，除了在培養(yǎng)基中添加碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)外，使用帶有加熱模塊可控制溫度、濕度與 CO 2 的小培養(yǎng)室或大溫控箱來精-確控制環(huán)境也十分重要。

隨著活細(xì)胞成像的普及，對(duì)實(shí)驗(yàn)中熒光基團(tuán)標(biāo)記的要求也越來越高，活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)如何實(shí)現(xiàn)更好的熒光標(biāo)記？一起奉上如下注意事項(xiàng)：

如需長(zhǎng)時(shí)間曝光，請(qǐng)盡量選擇用更長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光試劑，長(zhǎng)波長(zhǎng)試劑只需較低的激發(fā)功率，具有更低的光毒性，可以提供更健康的細(xì)胞狀態(tài)；

推薦針對(duì)特定的檢測(cè)讀值、光譜兼容性和信噪比對(duì)染色進(jìn)行優(yōu)化；

去除標(biāo)記溶液，并使用新鮮配制的培養(yǎng)基沖洗，可減少背景熒光；

搭配多種熒光基團(tuán)實(shí)現(xiàn)多重標(biāo)記，推薦使用熒光光譜查看器，以確保熒光染料間光譜重疊*小。