PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題是如何避免污染，pcr實(shí)驗(yàn)室在實(shí)際工作中，常見(jiàn)的有以下幾種污染類型:擴(kuò)增產(chǎn)物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。
PCR實(shí)驗(yàn)室的污染來(lái)源
1、樣本間交叉污染：
收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)外溢；不同樣本移液時(shí)忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實(shí)驗(yàn)器具及耗材未及時(shí)消毒滅菌；不同樣本同時(shí)開(kāi)蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散，相互交叉污染。
2、實(shí)驗(yàn)試劑污染：
主要是在 PCR 組分試劑加樣過(guò)程中，由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。 加樣過(guò)程中，因?yàn)?PCR 試劑對(duì)溫度十分敏感，需要通過(guò)冰浴使得 PCR 試劑和 PCR 板/管處于 0℃，但這個(gè)過(guò)程也是充滿了污染的風(fēng)險(xiǎn)的。
3、擴(kuò)增產(chǎn)物污染：
大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開(kāi)蓋，這是 PCR 反應(yīng)中*主要*常見(jiàn)的污染問(wèn)題。因?yàn)?PCR 產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 PCR 檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的 PCR 產(chǎn)物污染，就可形成假陽(yáng)性。
4、克隆
質(zhì)粒污染：
作為陽(yáng)性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。
要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防，工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分，各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域要有明顯的標(biāo)記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等)，以避免各個(gè)不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。實(shí)驗(yàn)室分為內(nèi)廊、緩沖區(qū)、污染區(qū)，檢驗(yàn)人員在緩沖區(qū)穿上防護(hù)服等裝備，全副武裝后分別進(jìn)入到試劑準(zhǔn)備區(qū)，標(biāo)本制備區(qū)，擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。檢驗(yàn)人員不可以將任何物品帶進(jìn)實(shí)驗(yàn)區(qū)。
檢驗(yàn)人員在試劑準(zhǔn)備區(qū)準(zhǔn)備試劑，這里是實(shí)驗(yàn)的開(kāi)始。試劑準(zhǔn)備完成后，通過(guò)傳遞窗傳送到標(biāo)本制備區(qū)，在這里檢驗(yàn)人員將標(biāo)本和試劑混合好后，再通過(guò)傳遞窗傳送到擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。在這個(gè)區(qū)域，檢驗(yàn)人員將得到*終的核酸檢測(cè)結(jié)果。
合理的系統(tǒng)設(shè)置，合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng);嚴(yán)格的氣流壓力控制，保證不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。
規(guī)范的操作，臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)，在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。清潔工作及時(shí)、正確。實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后，必須立即對(duì)本區(qū)進(jìn)行清潔。
嚴(yán)格的管理:嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。在各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服(如不同顏色)，當(dāng)工作人員離開(kāi)時(shí)不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;盡量減少在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是*主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，廢液不能在實(shí)驗(yàn)室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉，用過(guò)的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等.
Pcr實(shí)驗(yàn)室消毒用什么？
過(guò)氧化氫超強(qiáng)的氧化能力可以破壞微生物體內(nèi)的原生質(zhì)，殺滅微生物，殺菌譜很廣，不僅可以殺滅細(xì)菌繁殖體和真菌，對(duì)細(xì)菌芽孢也有很好的殺滅作用，同時(shí)過(guò)氧化氫是一種清潔的化工產(chǎn)品，幾乎沒(méi)有任何污染。使用過(guò)氧化氫霧化不僅可以同時(shí)完成微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同物體表面、以及不易看到的污染死角的消毒，而且消毒徹底、消毒效果好，因此干霧化過(guò)氧化氫可以作為pcr微生物實(shí)驗(yàn)室徹底消毒的一種方法進(jìn)行使用。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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