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技術(shù)文獻

傷口愈合/細胞劃痕實驗方法分享 @遠慕新聞
閱讀次數(shù):510 發(fā)布時間:2020/4/23 10:56:01
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細胞劃痕實驗(Wound Healing)是一種操作簡單,經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。這種方法的原理是,當(dāng)細胞長到融合成單層狀態(tài)時,在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域,稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”愈合;镜牟襟E包括“劃痕”的制造,細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。

特點:

1. 在一定程度上模擬了體內(nèi)細胞遷移的過程。

2. 非常適合研究細胞與胞外基質(zhì)(ECM),細胞與細胞之間相互作用引起的細胞 遷移。

3. 與包括活細胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容,可用于分析細胞間的相互作用

4. 研究細胞遷移的體外實驗中*簡單的方法。




傳統(tǒng)實驗方法實驗步驟:

1. 培養(yǎng)板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標記(方便拍照時定位同一 個視野)。

2. 細胞消化后接入12孔板,數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜(數(shù)量少時可培養(yǎng)一段時間至鋪滿板底)。

3. 細胞鋪滿板底后,用1 ml槍頭垂直于孔板制造細胞劃痕,盡量保證各個劃痕寬度一致。(人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實驗結(jié)果,這也是該方法的缺陷。)

4. 吸去細胞培養(yǎng)液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產(chǎn)生的細胞碎片。

5. 加入無血清培養(yǎng)基,拍照記錄。

6. 將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),每隔4-6小時取出拍照。

7. 根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結(jié)果。

Culture Insert方法

1. 準備細胞,培養(yǎng)液,culture Insert。

2. 如圖,將細胞接種于Dish中間的Insert,細胞長滿Insert 區(qū)域后用鑷子移除Insert即可產(chǎn)生500 μm寬度的劃痕。

3. 每隔4-6小時拍照記錄。

4. 根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實驗結(jié)果。

總結(jié):相比較于傳統(tǒng)的劃痕實驗,Ibidi的設(shè)計更科學(xué)、重現(xiàn)性更好

原創(chuàng)作者:上海遠慕生物科技有限公司

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