pUC18 和 pUC19質(zhì)粒圖譜遠慕新聞√_技術(shù)文章

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pUC18 和 pUC19質(zhì)粒圖譜遠慕新聞√
閱讀次數(shù)：968 發(fā)布時間：2019/12/23 10:13:09

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pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是*常用的質(zhì)粒載體，其結(jié)構(gòu)組成緊湊，幾乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注冊號為 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而來，其中 lacZ (MSC)來自 M13mp18/19 圖 3-4 是其質(zhì)粒圖譜。

這兩個質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)幾乎是完全一樣的，只是多克隆位點的排列方向相反。這些質(zhì)粒缺乏控制拷貝數(shù)的 rop 基因，因此其拷貝數(shù)達 500-700 。 pUC 系列載體含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分編碼序列，在特定的受體細胞中可表現(xiàn) α-互補作用。因此在多克隆位點中插入了外源片段后，可通過 α-互補作用形成的藍色和白色菌落篩選重組質(zhì)粒。

特征序列區(qū)位：

&NBS p;

pBR322_origin	&NBS p;	1471 - 852
Ampicillin		2486 - 1626
lac_promoter		543 - 514
AmpR_promoter		2556 - 2528
M13_pUC_rev_primer		500 - 478
M13_reverse_primer		479 - 461
M13_forward20_primer		379 - 395
M13_pUC_fwd_primer		364 - 386
lacZ_a		398 - 250
pGEX_3_primer		51 - 29
Orf2		2486 - 1626

NOS terminator sequence:

ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat

設(shè)計引物：

Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位點GGATCC及三個保護堿基)

Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位點GAATTC及三個保護堿基)

請查一下NOS終止子序列內(nèi)有沒有這兩個酶切點。如果沒有，引物合成后，以任何一種pCAMBIA為模板都能擴增到該終止子序列。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司