臺(tái)盼藍(lán)使用最佳濃度及時(shí)間是多少？_技術(shù)文章

技術(shù)文獻(xiàn)

臺(tái)盼藍(lán)使用最佳濃度及時(shí)間是多少？
閱讀次數(shù)：3997 發(fā)布時(shí)間：2019/12/12 9:47:24

分享到：

問：現(xiàn)在剛剛開始做干細(xì)胞，想自己計(jì)數(shù)白細(xì)胞，用的是Sigma的0.4%臺(tái)盼藍(lán)，1:1混合，從2分鐘開始細(xì)胞死亡越來(lái)越多，例如2分時(shí)有10%死亡，到5分鐘就死一半了，到底是幾分鐘計(jì)數(shù)*準(zhǔn)確呢？& 還有一個(gè)問題，看到有1:1使用，也有1:9的，用哪種濃度呢？

答1 ：0.4%應(yīng)該是1:1混合的，1:9的是4%濃度的，這個(gè)染色的時(shí)間不應(yīng)該太長(zhǎng)的，因?yàn)閷?duì)于胎盤藍(lán)這種大分子，不能滲透就如細(xì)胞膜，但是如果染色時(shí)間過長(zhǎng)，會(huì)因?yàn)榘套饔眠M(jìn)入細(xì)胞里，所以時(shí)間長(zhǎng)了之后看到很多細(xì)胞都是藍(lán)色，不一定是細(xì)胞死了，可能是臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)去了，我們一般混合一下就在顯微鏡下看了，要是死細(xì)胞，細(xì)胞膜有破裂，細(xì)胞很快就藍(lán)了。

答2：采用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)，這樣可以快速有效的將單位體積的總細(xì)胞數(shù)、活細(xì)胞數(shù)、死細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞活性直接讀出，如果用目測(cè)法只能將細(xì)胞總數(shù)大致估計(jì)出。

答3 ： 3分鐘內(nèi)觀察，是和細(xì)胞混一下就滴出來(lái)觀察，大于3分鐘活細(xì)胞也會(huì)被染上不準(zhǔn)的

答4 ：臺(tái)盼藍(lán)母液是0.4%，用的時(shí)候1:10稀釋使用（1:1使用的話細(xì)胞受不了的），5分鐘之內(nèi)數(shù)完。
還有就是評(píng)判細(xì)胞的死活時(shí)，染成藍(lán)色或者鏡下不透亮的細(xì)胞都是死細(xì)胞！

答5：混合后要在3分鐘內(nèi)計(jì)數(shù)完畢，要不然細(xì)胞死的越來(lái)越多，結(jié)果不準(zhǔn)。如果時(shí)間上來(lái)不及的話，可以先在顯微鏡下拍照再計(jì)數(shù)。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司