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對于養(yǎng)細(xì)胞的人來說，可謂是談 「污」色變，任何時(shí)候聽見細(xì)胞污染晴空萬里立馬暴風(fēng)雨，而細(xì)胞污染又是養(yǎng)細(xì)胞過程中，尤其是新手經(jīng)常遇到的問題。

細(xì)胞污染是一個(gè)很廣的范圍，微生物的種類更是各種各樣，不同的污染的原因不同處理也不同，因此掌握對常見細(xì)胞污染的識別至關(guān)重要。

自己也是從剛開始養(yǎng)細(xì)胞 3 天一個(gè)小污染 7 天一個(gè)大污染過來，也積累了些經(jīng)驗(yàn)，自己整理歸納了一下，希望對養(yǎng)細(xì)胞的同學(xué)有所幫助。

講細(xì)胞污染之前需要說明一點(diǎn)，就是對待細(xì)胞大家一定要給予極大的重視，因?yàn)榧?xì)胞相關(guān)的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的狀態(tài)是很重要的。

對于確定污染的細(xì)胞的辦法就是及時(shí)丟棄，積極排查細(xì)胞污染的原因，除非是特別重要的細(xì)胞才會去搶救，而且搶救污染的細(xì)胞本來就有一定的風(fēng)險(xiǎn)，搞不好還可能會污染別的細(xì)胞。

下面進(jìn)入正題，一般細(xì)胞污染大概分為細(xì)菌污染、真菌污染、支原體污染還有說法不一的黑膠蟲污染等。每種污染的特征都很明顯，因?yàn)槲⑸�物種類實(shí)在太多，所以我就選取比較典型和常見的污染講下。

識別細(xì)胞污染的步就是從培養(yǎng)箱拿出細(xì)胞后觀察細(xì)胞培養(yǎng)液的顏色，以常用的 DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)液為例，一般使用 DMEM 配制的培養(yǎng)液的顏色為鮮紅色，而且是澄清透亮的，注意透亮不代表沒有顏色。

但是大多數(shù)情況下會看到以下幾種顏色，1 號管顏色偏紫一般原因是培養(yǎng)基 ph 升高置 ph 升高因有兩個(gè)一個(gè)是培養(yǎng)液在冰箱放置太久，培養(yǎng)液中的二氧化碳逸出，第二個(gè)是培養(yǎng)箱沒二氧化碳了，而且整個(gè)培養(yǎng)箱的細(xì)胞都會出現(xiàn)一樣的顏色。

2 號管顏色有點(diǎn)偏紅，一般是細(xì)胞生長消耗營養(yǎng)物質(zhì)導(dǎo)致液 ph 稍微降低。

3 號和 4 號管顏色發(fā)黃，導(dǎo)致培養(yǎng)液顏色發(fā)黃的原因是培養(yǎng)液中的營養(yǎng)被大量消耗，培養(yǎng)液 ph 降低導(dǎo)致，導(dǎo)致 ph 降低的原因一般是細(xì)胞生長太快太滿，提醒自己需要給細(xì)胞換液或者傳代，但是有時(shí)細(xì)胞密度低生長速度緩慢也會出現(xiàn)這種情況，這時(shí)候就要懷疑是不是細(xì)胞污染了，除了細(xì)胞以外有其他東西在消耗著培養(yǎng)液的營養(yǎng)。

5 號管培養(yǎng)液呈肉眼可見的渾濁，這種情況一般就是細(xì)菌污染，具體判斷還需要結(jié)合鏡下的特征。

第二步就是去導(dǎo)致顯微鏡下結(jié)合鏡下特征判斷：

細(xì)菌污染

特征：培液會變黃，而且是渾濁的黃色，鏡下觀察不到正常細(xì)胞形態(tài)，鏡下遍布細(xì)沙樣的黑點(diǎn)。細(xì)菌污染一定要及時(shí)查找原因，如果換液的細(xì)胞全部污染，就要懷疑是不是培養(yǎng)液污染，或者使用的器械污染。

如果傳代的細(xì)胞全部污染，也要懷疑培養(yǎng)液的問題，但是不要忽略了胰酶的問題。如果個(gè)別皿污染，有可能是一不小心蹭到或者槍頭碰到非無菌區(qū)域。

懷疑是胰酶或者是培養(yǎng)液的問題，可以空培養(yǎng)，取空皿只加入懷疑的胰酶或者培養(yǎng)液培養(yǎng)，第二天觀察。

霉菌污染

特征：培液不變渾濁但是會變黃，一般肉眼可見培養(yǎng)液中有團(tuán)塊的霉菌菌落，鏡下呈細(xì)絲竹節(jié)管狀，有菌絲結(jié)構(gòu)。霉菌梅雨季節(jié)多見，一般霉菌污染及時(shí)扔掉，徹底清潔培養(yǎng)箱

白色念珠菌污染

特征：培液顏色沒有明顯改變，污染嚴(yán)重會變黃，但是是澄清的黃不變渾濁，鏡下觀察到好多像球形的亮點(diǎn)，多的話會聚集成葡萄串樣。白色念珠菌污染不要搶救立馬扔了，救也救不好，而且白色念珠菌會互相通過孢子傳染。

桿菌污染

特征：鏡下看到許多桿狀的細(xì)菌，培液顏色沒有明顯改變。

支原體污染

特征：支原體污染很隱蔽，主要表現(xiàn)為細(xì)胞在生長速度變慢，細(xì)胞狀態(tài)形態(tài)改變，而且不斷死亡，鏡下沒啥改變，有時(shí)可見許多黑色的細(xì)胞碎片。檢測支原體污染可以使用支原體檢測試劑盒進(jìn)行檢測，現(xiàn)在市面上抗支原體的藥很多，效果也都可以。不確定是不是支原體污染可以使用支原體藥試一下，如果細(xì)胞狀態(tài)明顯改善，有可能就是支原體污染。

黑膠蟲污染

特征：很邪乎，各種說法都有，一般認(rèn)為是鏡下許多黑點(diǎn)在不斷布朗運(yùn)動(dòng)，剛開始對細(xì)胞沒啥明顯影響，多時(shí)會影響細(xì)胞的生長。一般也治不好，就扔了吧�，F(xiàn)在主流認(rèn)為黑膠蟲是血清的問題，可以從新?lián)Q一批次血清試一下。

其實(shí)污染也沒有想象中的那么可怕，在做好消毒滅菌工作的基礎(chǔ)上，提高自己的無菌意識和操作技術(shù)才是*為重要的。

從進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室的穿著到超凈臺里物品的擺放都大有學(xué)問，對于剛養(yǎng)細(xì)胞的新手跟著師兄師姐養(yǎng)細(xì)胞是個(gè)很好的方式，剛開始不要著急上手，看師兄師姐操作時(shí)重點(diǎn)看他們的物品擺放、培養(yǎng)皿培養(yǎng)板開蓋的方式和放置、吹打細(xì)胞的手法等小細(xì)節(jié)。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司