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1. 沒有從結(jié)果反推設(shè)計整個實(shí)驗流程 在*開始就要考慮你將需要在申請或論文中展示的統(tǒng)計數(shù)據(jù)。所以在你訂購支試劑或者準(zhǔn)備細(xì)胞前，更為重要的是從結(jié)尾開始去考慮整個實(shí)驗流程。這意味著要去理解生物學(xué)的假說，以及選擇哪種統(tǒng)計方法測試該假說是否合理。 正如著名統(tǒng)計學(xué)家 Frank Anscombe 說過：「*重要的是我們能意識到真正的問題所在 ，并且盡我們所能去解決它。而不是另外找一個可以完全解決但毫不相干的替代問題�！� 理解這些假說以及了解如何測試它們的合理性，可以帶領(lǐng)研究人員們走上從實(shí)驗設(shè)計到數(shù)據(jù)分析再到統(tǒng)計測試的康莊大道。作為獎勵，通過為統(tǒng)計測試做準(zhǔn)備，您可以預(yù)測出實(shí)驗的規(guī)模，從而收集到充足的樣本使您實(shí)驗的*終結(jié)果更為可信。

2. 未能設(shè)計合適的抗體配色方案 在理解生物學(xué)檢測指標(biāo)后，可以開始進(jìn)行配色方案設(shè)計。 這需要多步驟實(shí)現(xiàn)，首先確認(rèn)檢測哪些分群，并且確認(rèn)*終的結(jié)果是檢測分群的百分比變化，還是檢測一種或多種標(biāo)志物的表達(dá)。 在此基礎(chǔ)上，了解儀器和配色方案的熒光染料對進(jìn)一步設(shè)計以減少補(bǔ)償問題和重要通道分辨率的損失。當(dāng)設(shè)計配色方案時不要遺漏通道或可能用到的染料。同時注意不要在設(shè)計配色方案時顧此失彼。 

3. 未能優(yōu)化實(shí)驗 優(yōu)化步驟須包括： A）試劑滴定 在任何流式實(shí)驗中所使用的試劑都應(yīng)該進(jìn)行滴定和優(yōu)化。 這樣做的目的是獲得*佳信噪比和減少背景干擾。 B）PMT 電壓。 光電倍增管（PMT）靈敏度是基于微珠檢測設(shè)置的，這將確保進(jìn)行實(shí)驗的電壓區(qū)間 PMT 的敏感度。 該電壓可根據(jù)特定的細(xì)胞/熒光組合進(jìn)一步進(jìn)行調(diào)整，從而進(jìn)一步優(yōu)化檢測靈敏度。

4. 未使用正確的對照 為了成功進(jìn)行流式實(shí)驗分析，需要在確立穩(wěn)健的多色配色方案，確定正確對照和進(jìn)行重復(fù)性好的分析上花費(fèi)大量的時間和精力。研究者*不想看到他們的發(fā)現(xiàn)不是由于真正的生物學(xué)變化無法被證實(shí)，而是由于儀器的問題無法被證實(shí)。 除了資源共享實(shí)驗室和核心設(shè)備花費(fèi)大量的時間在儀器質(zhì)量控制上，研究人員也會把質(zhì)量控制結(jié)合進(jìn)他們的實(shí)驗中。質(zhì)量控制管能實(shí)現(xiàn)確保實(shí)驗之間的 PMT 電壓一致，能確保實(shí)驗正確進(jìn)行并且能確保設(shè)門策略具有說服力。

5. 未能提供顯示或設(shè)門策略的細(xì)節(jié) 對于*終結(jié)果的展示，*重要的是可信度和可重復(fù)性。在展示設(shè)門策略時（即使是在補(bǔ)充材料中），需說明每個區(qū)域是如何設(shè)置的。諸如使用何種對照和是否使用區(qū)域百分比等問題需要進(jìn)行討論。 如果使用電子數(shù)據(jù)，請確保展示了數(shù)據(jù)的任何轉(zhuǎn)換形式，以及這些數(shù)據(jù)是如何持續(xù)應(yīng)用的。避免使用單變量圖（直方圖），確保展示了圖上的數(shù)據(jù)總數(shù)，以便理解實(shí)驗的量級。 *后，不要僅依靠圖片。流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)可以是非常量化的數(shù)據(jù)，也可以盡可能地使用表格展示數(shù)據(jù)。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司