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一、細(xì)胞：

1.選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí)約有105個(gè)細(xì)胞。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長(zhǎng)曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿。這樣，才能保證MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否則細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。

2.藥物濃度的設(shè)定。一定要多看文獻(xiàn)，參考別人的結(jié)果再定個(gè)比較大的范圍先初篩。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮小濃度和時(shí)間范圍再細(xì)篩。切記！否則，可能你用的時(shí)間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時(shí)間。

3. 時(shí)間點(diǎn)的設(shè)定。在不同時(shí)間點(diǎn)的測(cè)定OD值，輸入excel表，*后得到不同時(shí)間點(diǎn)的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什么時(shí)候變得平坦了（到了平臺(tái)期）那個(gè)時(shí)間點(diǎn)應(yīng)該就是的時(shí)間點(diǎn)（因?yàn)檫@個(gè)時(shí)候的細(xì)胞增殖抑制表現(xiàn)的*明顯）。

4.培養(yǎng)時(shí)間。200 ul的培養(yǎng)液對(duì)于10的4～5次方的增殖期細(xì)胞來說，很難維持68 h，如果營養(yǎng)不夠的話，細(xì)胞會(huì)由增殖期漸漸趨向G0期而趨于靜止，影響結(jié)果，我們是在48 h換液的。

5.MTT法只能測(cè)定細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力，不能測(cè)定細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。做MTT時(shí)，盡量無菌操作，因?yàn)榧?xì)菌也可以導(dǎo)致MTT比色OD值的升高。

6.理論未必都是對(duì)的。要根據(jù)自己的實(shí)際情況調(diào)整。

7.實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)置調(diào)零孔，對(duì)照孔，加藥孔。調(diào)零孔加培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜。對(duì)照孔和加藥孔都要加細(xì)胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜，不同的是對(duì)照孔加溶解藥物的介質(zhì)，而加藥組加入不同濃度的藥物。

二、實(shí)驗(yàn)步驟：

貼壁細(xì)胞：

1.收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至1 000-10 000孔，（邊緣孔用無菌PBS填充）。

2.5%CO2，37℃孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底（96孔平底板）,加入濃度梯度的藥物,原則上，細(xì)胞貼壁后即可加藥，或兩小時(shí)，或半天時(shí)間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥.一般5-7個(gè)梯度,每孔100 ul，設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔.建議設(shè)5個(gè)，否則難以反應(yīng)真實(shí)情況，3.5%CO2，37℃孵育16-48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀察。

4.每孔加入20 ulMTT溶液（5 mg/ml，即0.5% MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

5.終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。

6.每孔加入150 ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD490 nm處測(cè)量各孔的吸光值。

三、懸浮細(xì)胞：

1）收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度1×106/ml，按次序?qū)ⅱ傺a(bǔ)足的1640（無血清）培養(yǎng)基40 ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10 ul用培養(yǎng)液稀釋1 ug/ml，需預(yù)試尋找*佳稀釋度，1:10-1:20)；③需檢測(cè)物10ul；④細(xì)胞懸液50 ul（即5×104cell/孔），共100 ul加入到96孔板（邊緣孔用無菌水填充）。每板設(shè)對(duì)照（加100(儲(chǔ)存液100 1640）。

2）置37℃，5%CO2孵育16-48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀察。

3）每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4 h。（懸浮細(xì)胞推薦使用WST-1，培養(yǎng)4 h后可跳過步驟4），直接酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD570 nm（630 nm校準(zhǔn)）測(cè)量各孔的吸光值）

4）離心（1000轉(zhuǎn)x10 min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD570 nm（630 nm校準(zhǔn)）測(cè)量各孔的吸光值。

四、MTT的配制：

MTT一般現(xiàn)用現(xiàn)配，過濾后4oC避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成5 mg/ml保存在-20度長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融，小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分裝在EP管里，用的時(shí)候現(xiàn)配，直接往培養(yǎng)板中加，沒必要一下子配那么多，尤其當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就絕對(duì)不能再用了。

MTT有致癌性，用的時(shí)候小心,有條件帶那種透明的簿膜手套.配成的MTT需要無菌，MTT對(duì)菌很敏感；往96孔板加時(shí)不避光也沒有關(guān)系，畢竟時(shí)間較短，或者你不放心的時(shí)候可以把操作臺(tái)上的照明燈關(guān)掉。

配制MTT時(shí)用用PBS溶解,也有人用生理鹽水配，60℃水浴助溶。

五、關(guān)于細(xì)胞的接種(鋪板)：

細(xì)胞過了30代以后就不要用了,因?yàn)闋顟B(tài)不好了;培養(yǎng)板要用好的（進(jìn)口板），不好的板或重復(fù)利用的板只可做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

接種時(shí)按照預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索出的密度接種, 因?yàn)榧?xì)胞密度在10 000/ml左右時(shí)，所測(cè)得的OD值的區(qū)間即細(xì)胞抑制率（或者增值率）的所呈現(xiàn)的線性關(guān)系，結(jié)果*可信。如果鋪的太稀細(xì)胞的殺傷不會(huì)很明顯，太密細(xì)胞可能都會(huì)凋亡，因?yàn)榧?xì)胞長(zhǎng)的太快營養(yǎng)會(huì)不夠，*后導(dǎo)致死亡。且而細(xì)胞過密或者過少，增殖都會(huì)過快或者過慢，其增值率線性關(guān)系不佳。故而MTT細(xì)胞密度多采用10 000/ml，100 ul/孔。

細(xì)胞密度要根據(jù)不同細(xì)胞的特點(diǎn)來定.如果你做的藥品對(duì)細(xì)胞具有刺激作用那么取小點(diǎn)的細(xì)胞濃度，如果你做的藥品對(duì)細(xì)胞具有抑制作用那么取大點(diǎn)的細(xì)胞濃度，這樣與對(duì)照的區(qū)別更明顯，數(shù)據(jù)更好。懸浮細(xì)胞每孔的細(xì)胞數(shù)可達(dá)到105，貼壁細(xì)胞可為103-104。

1.首先細(xì)胞的接種密度一定不能過大，一般每孔1 000個(gè)左右就夠了，我認(rèn)為寧少勿多。尤其是對(duì)于腫瘤細(xì)胞。10 000/孔是太高了，這樣即使藥物有作用，MTT方法也是表現(xiàn)不出的，*佳點(diǎn)板濃度在4 000-5 000/孔，太少的話SD值會(huì)很大。

2.MTT本身就是比較粗的實(shí)驗(yàn)，增殖率10%左右的波動(dòng)都不算奇怪。特別是新手，20%的波動(dòng)也是常見的，所以很可能是技術(shù)原因引起的，特別是種板技術(shù)一定要過關(guān)。

3.我做的是腫瘤細(xì)胞的MTT實(shí)驗(yàn),這種細(xì)胞長(zhǎng)的很快一開始我是用100 000/ML的濃度來接種的,結(jié)果細(xì)胞長(zhǎng)的太滿結(jié)果是沒有梯度也沒有線性關(guān)系.后來調(diào)整濃度,用過40 000~80 000/ML的濃度都做過MTT實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)做的結(jié)果比較好點(diǎn)的是60 000~70 000/ML的濃度組的.用40 000/M的濃度的組,由于細(xì)胞少,藥物作用的梯度還是有,只是沒有很好的線性關(guān)系.還有根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度以及藥物的特性(有時(shí)間依賴性和濃度依賴性的藥物)來確定培養(yǎng)時(shí)間是48小時(shí)還是72小時(shí)。

注意細(xì)胞懸液一定要混勻，已避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接幾個(gè)就要再混勻一下。加樣器操作要熟練，盡量避免人為誤差。雖然移液器比移液管精確得多，但是如果操作不熟，CV會(huì)在8%左右。另外，吹散次數(shù)過多也會(huì)影響細(xì)胞活力。所以要熟練鞋、快些上板。

首先說說我的一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)：

1.吹打時(shí)懸液總量不能太多，達(dá)到吸管吸液量的3到4倍，可能比較容易混勻。10 ml的離心管里面裝3~4 ml的懸液：懸液太少容易吹起很多氣泡，懸液太多又不容易吹成單細(xì)胞懸液。

2.吸管的吸液量在1 ml左右：吸液量過多的話，一下吸起很多液體，管中所剩就很少，這樣吹打容易起泡，吸液量過少，吹打的力度就不夠，吹打就會(huì)不均勻。如果是吸液量1 ml多的吸管，總液量在5ml左右為益。

3.吸的時(shí)候要在懸液底部，然后提起來一點(diǎn)，但是吹下去的時(shí)候不要離開液面，否則容易吹打出氣泡。

4.吹打次數(shù)100左右，就可以吹打均勻了（有人認(rèn)為加細(xì)胞前吹打30－50次基本就差不多均勻了。加細(xì)胞的時(shí)候每接種2孔反復(fù)吹打3次，每吹打3次后槍頭垂懸與細(xì)胞懸液中5秒鐘，然后再以一定的速度吸取懸液。）

六、加入MTT：

個(gè)人認(rèn)為MTT*關(guān)鍵的是你的細(xì)胞數(shù)目和你加入真正起作用的的MTT的適當(dāng)比例，具體細(xì)胞數(shù)目和真正起作用的的MTT之間的關(guān)系確實(shí)不好確定，我認(rèn)為MTT多加一些比少加好一些。

MTT的量各家報(bào)道不同，一般是過量的，所以10 ul即夠了。如果不使用96孔板，培養(yǎng)基超過100 ul，MTT按照10%的比例加入，加入MTT以后振蕩一下讓MTT與培養(yǎng)基混勻，不過這個(gè)應(yīng)該關(guān)系不大。

如加入MTT后都有個(gè)別孔立即變?yōu)樗{(lán)黑色，則污染的可能性極大，另外MTT稀釋後加入細(xì)胞前還是需要以過濾的方式滅菌為宜，且在加MTT前可以先在鏡下觀察，看看是否有孔染菌，染菌的孔常常是臨近的。

七、如何清除上清：

百家爭(zhēng)鳴：

1.加DMSO前要把液體吸掉，但培養(yǎng)液里的紫色結(jié)晶可能會(huì)吸去，可在這之前先用平板離心機(jī)離心96孔板，2 000 r，5分鐘，然后吸掉上清(如果是懸浮細(xì)胞，則推薦此法,懸浮細(xì)胞要離心2500 rpm×10 min，且其做MTT用圓底型96孔板,清除上清時(shí)注意不要把下面的結(jié)晶顆粒吸掉,建議各孔吸棄150-160 ul即可)。

2.我每次將MTT加入后，再孵育四個(gè)小時(shí)，然后用離心機(jī)離心1 000G，5 min。但是用槍小心地吸上清，還是會(huì)將一小部分藍(lán)色結(jié)晶吸出。所以還是建議翻轉(zhuǎn)倒扣的方法吧！

3.另外，可以直接將板翻轉(zhuǎn)倒扣（墊幾層濾紙）2－3次，比用“吸”的辦法更不容易使細(xì)胞脫離出來�？梢暂p拍，或者傾斜一點(diǎn)幫助吸液，發(fā)現(xiàn)紫色結(jié)晶幾乎沒有肉眼可見的掉脫，但前提是你本身細(xì)胞貼壁要比較牢，半貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞容易脫離。假如藥物作用時(shí)間長(zhǎng)的話，陰性對(duì)照組可能由于細(xì)胞過多而使加入ＭＴＴ后形成的結(jié)晶漂起來，這樣就不能直接倒掉上清。

4.做MTT時(shí)，這一步驟一定要小心，不要采用倒的方式。因?yàn)橘N壁不牢的細(xì)胞會(huì)被倒掉，從而影響OD值。懸浮細(xì)胞，不要翻板，離心后也不要翻板，這個(gè)方法害死人。

5.加完MTT反應(yīng)3－4 h后，從培養(yǎng)箱取出96孔板的動(dòng)作要輕柔，避免振蕩結(jié)晶,使其滑落.你可以試著將96孔板傾斜30度角，然后用槍尖慢慢吸，有的細(xì)胞可以用排槍一起吸，有的則要耐心的一個(gè)個(gè)用槍頭吸，槍尖的力度和方向要保證每個(gè)孔都一致。不要讓槍頭接觸到孔底，且一旦傾斜孔板后就不要反復(fù)傾斜放平，這樣也會(huì)使結(jié)晶脫落。

八、避免清除上清而改進(jìn)的方法：

由于一般可離心96孔板的離心機(jī)不好找。既使是貼壁細(xì)胞做MTT時(shí)，用DMSO溶解得到結(jié)果也不好，不是得不到預(yù)期結(jié)果就是可重復(fù)性差。

解決方法1:

用以下文獻(xiàn)方法：周建軍等，評(píng)價(jià)抗癌物質(zhì)活性的改良MTT方法，中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1993，24（10）：455-457

具體方法：

配三聯(lián)溶解液：10%SDS，5%異丁醇，0.012 mol/LHCL，蒸餾水溶解。

操作：在培養(yǎng)板上加一定密度的細(xì)胞懸液，90 ul/孔；如需給藥，則再于同時(shí)(懸浮細(xì)胞)或4h后(貼壁細(xì)胞)加入不同濃度的藥物10ul/孔，均設(shè)三復(fù)孔。另外，每塊板上另沒一個(gè)調(diào)零孔(只加培養(yǎng)液，不含細(xì)胞和藥物)。培養(yǎng)2 d后，加入MTT溶液20 ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后加入上述三聯(lián)液100 ul/孔，于37度放置過夜后，用酶標(biāo)儀測(cè)各孔A570值。

優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)化操作，提高了可靠性。

就是比較貴，如果經(jīng)費(fèi)充足，用這個(gè)是不錯(cuò)的。

4、在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，參比波長(zhǎng)為600 nm或600 nm以上。

九、加入DMSO：

在同一批實(shí)驗(yàn)中不要更換DMSO。加DMSO前把孔中液體盡量棄干凈，沒有去掉上清直接加DMSO，一是沉淀會(huì)很難溶解.二培養(yǎng)液的顏色在檢測(cè)時(shí)也能被測(cè)到,會(huì)對(duì)*后結(jié)果造成影響。但前提是不能把細(xì)胞也一起吸掉，因?yàn)檫@樣帶來的誤差要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于培養(yǎng)液沒棄干凈帶來的誤差,所以要在保證細(xì)胞不被吸掉的前提下，盡量把培養(yǎng)液吸掉。如果培養(yǎng)液沒棄干凈，空白孔也要留有等量的培養(yǎng)液，這樣在檢測(cè)時(shí)可以盡量去除培養(yǎng)液的影響，DMSO的量也可為100ul或150ul。

1.加了DMSO后用振蕩器輕輕振蕩5－10min, 時(shí)間控制盡量嚴(yán)格一點(diǎn),放置時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)影響結(jié)果,值會(huì)偏大,且結(jié)果不可信。

2.加入DMSO后可用排槍反復(fù)抽吸助溶，溶解后盡快檢測(cè)。如果實(shí)驗(yàn)孔不多，建議用此法，因其比振蕩溶解效果好。

3.或放入37度放孵箱15分鐘溶解結(jié)晶。

十、OD值的測(cè)定：

至于測(cè)定波長(zhǎng)的選擇是因顯色溶液而異的，對(duì)于DMSO，溶解后呈紫（紅）色，490 nm有吸收值，而ATCC公司的MTT試劑盒用的不是DMSO，它的測(cè)定波長(zhǎng)是570。(就如ELISA實(shí)驗(yàn)選用OPD作底物測(cè)定波長(zhǎng)是492，選用TMB顯色液則用450)；而對(duì)于SDS和酸化異丙醇，則選用570 nm，并且建議以655nm作為參考波長(zhǎng)。

DMSO溶后10分鐘內(nèi)測(cè)，越放顏色越深，而SDS做為溶解液測(cè)吸收光值，其值可在三天內(nèi)保持不變。

細(xì)胞密度偏大測(cè)出的吸光度也會(huì)偏大，細(xì)胞密度小吸光度也會(huì)偏��；另外跟細(xì)胞狀態(tài)也有關(guān)系，細(xì)胞狀態(tài)不好的話，吸光度值也會(huì)低的；細(xì)胞數(shù)目少，或者是培養(yǎng)的時(shí)間短，OD值也會(huì)偏低。如果各個(gè)孔的孔間差異性特別明顯的話說明有可能存在污染,空白孔的OD值太高，很可能是細(xì)菌污染。

復(fù)孔直接的OD值差別一般應(yīng)在0.1－0.15，差別太大考慮：1.接種細(xì)胞數(shù)不均勻，或是接種太多，應(yīng)保證每孔一致，一般是每孔1 000－10 000個(gè)。可以細(xì)胞細(xì)胞計(jì)數(shù)后，加入細(xì)胞懸液，再補(bǔ)培養(yǎng)基到預(yù)定體積，并輕輕吹打幾次，使細(xì)胞均勻分布，這樣比直接加入預(yù)定體積的細(xì)胞懸液要好，接種時(shí)應(yīng)加含血清培養(yǎng)基。2.貼壁時(shí)間：18－24 h，如果不夠，未懸浮的細(xì)胞會(huì)被吸掉。

一般為了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確，每個(gè)濃度可以設(shè)5－6個(gè)復(fù)孔，可以*后統(tǒng)計(jì)時(shí)，可以除去一個(gè)值和一個(gè)值，或者除去其中數(shù)據(jù)離譜的值，這些離譜數(shù)字的出現(xiàn)與細(xì)胞是否污染，細(xì)胞是否在培養(yǎng)期間死去，是否培養(yǎng)液蒸發(fā)過多，加MTT液是否準(zhǔn)確，在37℃，5%二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育時(shí)間是否一定（1－4小時(shí)）等有密切的關(guān)系，當(dāng)然測(cè)定OD值的儀器工作狀態(tài)是否正常也非常重要！(一般開機(jī)預(yù)熱20 min)。

MTT方法的吸收度在0.2～0.8之間誤差較小。這和分析化學(xué)中的lambert-beer定律有關(guān)， 對(duì)朗伯-比爾定律的偏離在吸光光度分析中，經(jīng)常出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不呈直線的情況，特別是當(dāng)吸光物質(zhì)濃度較高時(shí)，明顯地看到通過原點(diǎn)向濃度軸彎曲的現(xiàn)象（吸光度軸彎曲)。這種情況稱為偏離朗伯-比爾定律。若在曲線彎曲部分進(jìn)行定量，將會(huì)引起較大的誤差。在吸光光度分析中，儀器測(cè)量不準(zhǔn)確也是誤差的主要來源。任何光度計(jì)都有一定的測(cè)量誤差。這些誤差可能來源于光源不穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)條件偶然變動(dòng)，讀數(shù)不準(zhǔn)確等。

在光度計(jì)中，透射比的標(biāo)尺刻度均勻。吸光度標(biāo)尺刻度不均勻。對(duì)于同一儀器，讀數(shù)的波動(dòng)對(duì)透射比為一定值；而對(duì)吸光度讀數(shù)波動(dòng)則不再為定值。吸光度越大，讀數(shù)波動(dòng)所引起的吸光度誤差也越大透射比很小或很大時(shí)，濃度測(cè)量誤差都較大，即光度測(cè)量選吸光度讀數(shù)在刻度尺的中間而不落兩端。待測(cè)溶液的透射比T在15%~65%之間，或使吸光度A在0.2~0.8之間，才能保證測(cè)量的相對(duì)誤差較小。當(dāng)0.434(或透射比T=36.8%)時(shí)，測(cè)量的相對(duì)誤差*小。

其它的聲音：

1.用570 nm波長(zhǎng)的濾光片，因?yàn)镸TT在這個(gè)波長(zhǎng)的吸光度是峰值，換句話說靈敏度高。用其它波長(zhǎng)的也有，一般是490 nm，但我的經(jīng)驗(yàn)靈敏度降低一半。

2.我們用的BIO-TEK公司的ELx800，一般值在2以下都是可靠的,如果復(fù)孔之間值相差太大就要考慮是否是實(shí)驗(yàn)過程中的誤差，我曾經(jīng)看到園子的有些帖子報(bào)道說OD值大概在0.2-1.2范圍內(nèi)與活細(xì)胞數(shù)有較好的線性關(guān)系，但OD值在0.3-0.9范圍內(nèi)可能更佳，若你的OD值不在這個(gè)范圍內(nèi)則你實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞數(shù)可能不太合適，應(yīng)調(diào)整你的細(xì)胞數(shù)。

邊緣效應(yīng)

十一、關(guān)于如何計(jì)算IC50：

Pn:*小陽性反應(yīng)率

舉個(gè)例子：各組濃度0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001，稀釋倍數(shù)為10，濃度為0.1，抑制率為0.95、 0.80、0.65、0.43、0.21，0.06。

代入計(jì)算公式：

十二、結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：

所有數(shù)值以x±s表示，應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，p<0.05時(shí)為相差顯著，p<0.01時(shí)為相差非常顯著�？梢砸詴r(shí)間為橫軸，光吸收值為縱軸繪制細(xì)胞生線，專門公式求IC50。或計(jì)算抑制率。細(xì)胞死亡率%=OD對(duì)照組-OD實(shí)驗(yàn)組/OD對(duì)照組

excel表中可以做兩兩比較的T-test，這個(gè)你可以參考一下；你的數(shù)據(jù)應(yīng)該用多個(gè)樣本均數(shù)的T-test，方差分析也可。用的軟件是SPSS或者SAS。

強(qiáng)烈建議培養(yǎng)板不要重復(fù)使用:1、泡酸是可以，但是泡完酸的板子很不利于細(xì)胞的生長(zhǎng)，會(huì)出現(xiàn)帖壁不好，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢等情況.2、這樣的板子消毒滅菌很不徹底，如果有萬一,則因小失大.3、重復(fù)用的板子洗不干凈在培養(yǎng)過程中易出現(xiàn)雜質(zhì)。

洗凈后用2% NaoH浸泡4小時(shí)，再用1％稀鹽酸浸泡4小時(shí)，沖洗15遍，蒸餾水沖洗3遍，烘干，UV照射過夜(紫外2小時(shí)以上消毒即可)

泡酸2－4小時(shí)，老師讓我們別超過4小時(shí)，（普通的玻璃儀器是過夜）。撈出，沖洗干凈，烘干后，UV 照射過夜。估計(jì)跟其他收集在一起，鈷60照射消毒.

1.做完MTT后用大水流盡量將板沖凈，然后用洗衣粉水泡幾個(gè)小時(shí)（小心讓洗衣粉先化開）。2.用自來水沖凈洗衣粉水，倒扣晾干.3.重鉻酸鉀加濃硫酸配成的酸液中浸泡過夜泡洗液(六小時(shí)以上即可)后自來水洗凈（20次左右）每個(gè)孔都要處理。4.用去離子水沖洗3遍，雙蒸水沖洗3遍，烤干。5.超凈臺(tái)中紫外線照射2個(gè)小時(shí)左右，就可以用了，不可以高壓。

5、做實(shí)驗(yàn)前，96孔板至少在紫外燈下照射30分鐘，但不能長(zhǎng)期照射。紫外線長(zhǎng)期照射可使板變黃，我的兩塊板放在超靜臺(tái)上忘了拿出來，一直照了兩個(gè)星期，等我從超靜臺(tái)上取出板已經(jīng)變成黃色。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司