相信大家作為實驗小白，剛進實驗室時，學(xué)的個實驗就是提
質(zhì)粒。
想當年我們作為化學(xué)轉(zhuǎn)生物的研究生剛進實驗室時，覺得好酷炫的技術(shù)，跟在師兄后面，認真的對每一步的步驟都做好筆記，后來才發(fā)現(xiàn)你自己不過是做了一份手寫版的說明書。
接下來的 N 年里，就是轉(zhuǎn)化，涂板，挑單克隆，搖菌，提質(zhì)粒，酶切，連接，好想能夠有一個提質(zhì)粒機器人，實現(xiàn)自動化生產(chǎn)。當我們習慣了省時省力，或許我們都已經(jīng)連提取的原理都已經(jīng)忘了。
那么如何避免成為一個機器人呢，我想不僅僅是要提的出質(zhì)粒，還要在出現(xiàn)問題時知道如何找到原因并解決，這樣你就可以被稱為人工智能，簡稱 AI。
質(zhì)粒是攜帶外源基因進入細菌中擴增或者表達的重要媒介，常用的方法有煮沸裂解法，堿提法等。而我們常用的 kit 是采用堿提法。
不同品牌的
試劑盒具體操作步驟可能不同，但這個萬變不離其宗，基礎(chǔ)知識點還是不變的。
菌體在強堿性條件下裂解，釋放出包括質(zhì)粒在內(nèi)的核酸，
蛋白等物質(zhì)。
當 pH 恢復(fù)中性時，共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒 DNA 復(fù)性快，而線性的染色體 DNA 復(fù)性緩慢，細菌蛋白質(zhì)、破裂的
細胞壁和變性的染色體 DNA 會相互纏繞成大型復(fù)合物，而后者被十二烷基硫酸鹽包蓋。
當用鉀離子取代鈉離子時，復(fù)合物會從
溶液中有效地沉淀下來，離心除去變性劑后，就可以從上清中回收復(fù)性的質(zhì)粒 DNA。
未提出質(zhì)�；蛘叩寐瘦^低？
1、菌。用錯板子導(dǎo)致菌沒有長起（抗生素的種類和濃度）
搖過夜一不小心第二天忘記了此時多半菌液老化
2、堿裂解不充分。高速離心收菌倒掉上清后，能彈彈彈（彈不走魚尾紋）
3、溶液使用不當。看清哪些溶液應(yīng)加熱到一定的溫度才能使用；哪些又是應(yīng)該 加入醇之后使用
4、拷貝數(shù)較低或者菌體中無質(zhì)粒。低拷貝數(shù)載體常常導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 提取量過低；質(zhì)粒在某些菌體中經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接可能出現(xiàn)丟失；
基因組 DNA 或蛋白質(zhì)污染！
1、加溶液 2 后不要劇烈搖晃，溶液 2 處理時間不能太久，一般顛倒 6-8 次即加溶液 3 中和，堿裂解時間過長容易產(chǎn)生基因組污染；
2、加溶液 3 后要混合充分，離心后取上清小心不要吸到白色沉淀；
3、不要使用過多菌體。溶液 P1、P2、P3 處理并離心后溶液應(yīng)為澄清的，如果還混有微小蛋白懸浮物，可再次離心。
不過我們也不能死搬硬套，也要學(xué)會融會貫通，舉一反三，當出現(xiàn)超出大綱范圍的題目如出現(xiàn) 15kb 的大型質(zhì)粒，這時要注意采用溫和的方法（溶菌酶法），因為劇烈的方法容易使它受到破壞。
俗話說的好，每日一提，強身健體。不過小提怡情，大提還需謹慎啊，當聽說曾經(jīng)發(fā)生過由于沒有配平而出現(xiàn)
離心機直接旋出甚至將天花板損壞的壯觀場景，你們能想象我如今坐在高速離心機旁邊的心情嗎，（幸好我買了保險）。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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