常用
抗體標(biāo)記熒光染料的選擇
隨著免疫熒光技術(shù)的不斷發(fā)展，熒光染料及其標(biāo)記的抗體偶聯(lián)物也被廣泛的應(yīng)用于生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。目前，市場上抗體及
蛋白標(biāo)記的熒光染料主要有CFTM系列（BIOTIUM, USA）； Alexa Fluor®系列 （Life technology, USA）； DyLight系列；Cy系列； IR Dye系列等等。使用*多的為AlexaFluor®系列和CFTM系列。
CFTM系列染料的核心對(duì)比AlexaFluor®系列具有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 新型羅丹明核心
羅丹明染料以優(yōu)異的耐光性和良好的熒光量子產(chǎn)量著稱。因此很多Alexa Fluor® 染料具有羅丹明核心結(jié)構(gòu)，但是，傳統(tǒng)羅丹明的化學(xué)結(jié)構(gòu)很難從長波長的熒光染料延伸至遠(yuǎn)紅外區(qū)域甚至是更具挑戰(zhàn)性的近紅外區(qū)域，而且生物偶聯(lián)后其水溶性并不理想。Biotium 科學(xué)家發(fā)現(xiàn)從綠色到近紅外多色熒光的羅丹明染料的新型化學(xué)方法。該方法被有效的應(yīng)用于CF染料的產(chǎn)品中，尤其是遠(yuǎn)紅外CF染料，而且通過這種方法制備的染料不僅水溶性極佳而且耐光性極好。
2. 特異性高的近紅外染料
近紅外染料的特點(diǎn)是比可見光范圍要大很多，大滴的染料常會(huì)導(dǎo)致染料水溶性低、染料聚合體多、熒光量子產(chǎn)量差等問題。為了解決這些問題，許多商用的近紅外染料比如Alexa Fluor®、 DyLight® dyes 和 IRDyes®近紅外染料，在制備時(shí)吸附了大量的帶負(fù)電荷的磺化基團(tuán)，其磺化作用可以在一定程度上會(huì)提高染料的溶解性和熒光性，但這樣也帶來了另一些更加嚴(yán)重的問題，經(jīng)這種染料標(biāo)記的生物耦聯(lián)物的非特異性結(jié)合。例如：與大量負(fù)電荷結(jié)合后可以顯著的改變抗體的等電點(diǎn)，進(jìn)而影響抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)。綜合以上內(nèi)容，Biotium 的科學(xué)家用革命性的方法設(shè)計(jì)出近紅外染料C F，在避免引入大量負(fù)電荷的情況下，極大的保證了染料優(yōu)異的理化特性。Biotium 近紅外的CF 染料以花青或羅丹明染料為核心結(jié)構(gòu)，該核心結(jié)構(gòu)的特殊化學(xué)修飾限制了染料的分子內(nèi)位移，從而獲得染料的高量子產(chǎn)率和更好的水溶性。因此，近紅外CF染料比其他近紅外染料熒光強(qiáng)度更高，光穩(wěn)定性好。*重要的是，在免疫印跡實(shí)驗(yàn)上應(yīng)用近紅外CF染料標(biāo)記蛋白質(zhì)樣品相對(duì)于其他商業(yè)用近紅外染料制備的抗體偶聯(lián)物，限度的提高了信噪比。
3. 優(yōu)異的標(biāo)記效率
生物偶聯(lián)后的活性染料一般很容易水解，會(huì)在運(yùn)輸，操作及儲(chǔ)存中帶來諸多不便，*終致染料結(jié)合效率低下。像Alexa Fluor® dyes,DyLight? dyes ａnd IRDyes®等嚴(yán)重的磺化作用有較強(qiáng)的吸濕性，惡化水解作用等問題。例如： AlexaFluor® 488 在應(yīng)用時(shí)琥珀酰亞胺脂酯 SE 活性部分遠(yuǎn)低于50%（AlexaFluor488微量標(biāo)記
試劑盒產(chǎn)品信息，Invitrogen）。相反，所有Biotium 的CF染料具有相對(duì)穩(wěn)定的胺活性的SE基團(tuán)型，這比大部分AlexaFluor 染料的SE更耐水解�？傮w來說，CF染料SE產(chǎn)品一貫的給出更高的標(biāo)記效率，提供給用戶更好的使用價(jià)值。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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