實(shí)驗(yàn)方法原理：
RNA 提取過(guò)程中*應(yīng)注意的是：組織或
細(xì)胞在變性液中完全裂解的同時(shí)，如何抑 RNase 引起的 RNA 降解問(wèn)題。在直接加工新鮮組織時(shí)，所有的細(xì)胞能盡可能快的接觸變性劑以完全裂解這一步是相當(dāng)重要的。一些難以加工的組織，例如：堅(jiān)硬的腫瘤、細(xì)菌細(xì)胞、植物根部等，即使使用勻漿器一般也不能很有效的裂解。此時(shí)，通�？梢栽谔幚斫M織時(shí)，先對(duì)其進(jìn)行冷凍處理，以使之充分裂解。
為使迅速冷凍樣品，以使整塊組織徹底冷凍，因此，在冷凍前應(yīng)先將組織切成小塊，然后將其浸沒(méi)于液氮中。這將會(huì)使組織塊以*快的方式冷凍。另外，也可將一個(gè)金屬盤(pán)置于干冰上作為冷凍的表面，以對(duì)片狀的組織進(jìn)行快速的冷凍。
下面三種力法分別描述用三種不同的方式加工 0.lg 冷凍的小鼠肝臟組織，以產(chǎn)生組織/細(xì)胞裂解產(chǎn)物。裂解產(chǎn)物可進(jìn)行 RNA 的提取純化，或用于估計(jì) pdy（A）+RNA 的產(chǎn)量。雖然這三種方法同是利用胍緩沖液以徹底裂解細(xì)胞，但是它們?cè)谙惹暗牟襟E中，即如何加工組織或是在如何裂解的過(guò)程中有所不同。
實(shí)驗(yàn)步驟
方法一: 在勻漿器中加工冷凍的組織
產(chǎn)量：4.1ugpoly（A）ˉRNA
冷凍的組織在干冰上被切成大約 Cl5 cm2 的小片，轉(zhuǎn)人勻漿器中，一邊緩緩加入裂解緩沖液一邊不斷的勻漿。
方法二：通過(guò)注射器加工冷凍的組織。
產(chǎn)量：3.2ugpoly（A）-RNA。
冷凍的組織在干冰被切成大約 0.5 cm2 的小片，一邊緩緩加人裂解緩沖液一邊通過(guò) 18 號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)注射針頭反復(fù)抽打十次。
方法三：在液氮中將組織研磨成粉末。
產(chǎn)量：7.1ugpoly（A）ˉRNA。
將冷凍的樣品放在研缽中進(jìn)行劇烈研磨以使其粉碎。當(dāng)組織被磨成粉狀后，向研缽中加人變忭緩沖液，并攪拌均勻�；旌衔锶诨髴�(yīng)轉(zhuǎn)移到合適的容器中進(jìn)行進(jìn)一步的操作。在液氮中研磨組織至粉末狀，細(xì)胞的裂解則更完全，因此能得到比前兩種方法多近一倍的產(chǎn)量。
可見(jiàn)，即使對(duì)于 N—種組織，采用同一種試劑進(jìn)行 RNA 的提取，僅僅由于組織樣品處理方法的不同，就導(dǎo)致了 RNA 提取量的顯著差異。因此，在對(duì)不同的組織進(jìn)行 RNA 提取時(shí)，不僅要選擇*合適的提取方法，同時(shí)也要根據(jù)所處理的組織，以及提取目的以選擇*為合適的組織處理方法，只有這樣才能獲得*佳效果。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
客服一
