表達(dá)β-半乳糖苷酶噬菌體的噬菌斑分析_技術(shù)文章

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表達(dá)β-半乳糖苷酶噬菌體的噬菌斑分析
閱讀次數(shù)：845 發(fā)布時(shí)間：2018/9/25 9:19:33

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材料：

LB或NZCYM頂層瓊脂或瓊脂糖，含有X-gal。對(duì)于3ml頂層瓊脂，加40µl 2%X-gal。X-gal要在臨用前才加入已冷卻的頂層瓊脂（47℃）中。

大腸桿菌鋪平板細(xì)菌。只有不是β-半乳糖苷酶的過量表達(dá)株，可采用任何支持特異性λ噬菌體裂解生長(zhǎng)的大腸桿菌。細(xì)菌染色體上單拷貝lacZ基因的存在不影響噬菌斑的檢測(cè)。

方法：
1. 將λ噬菌體原種于SM+明膠液稀釋。
2. 用10µl適當(dāng)稀釋的λ噬菌體感染0.1ml鋪平板細(xì)菌。感染培養(yǎng)物37℃溫育20min。
3. 用3ml含X-gal的已熔頂層瓊脂（47℃）至個(gè)試管，通過輕拍或輕微渦旋振蕩混勻，隨后倒入至瓊脂平板上。
4. 用剩下的噬菌體原種的稀釋液重復(fù)步驟3。
5. 當(dāng)頂層瓊脂凝固后，將平板于37℃倒置培養(yǎng)15-18h。
6. 將平板哦成那個(gè)37℃培養(yǎng)箱中取出，再于室溫下放置2h，然后記錄噬菌斑的顏色。

生化試劑的種類與等級(jí)說明：
（1）免疫試劑包括抗體及抗血清、正常血清及補(bǔ)體、抗原、免疫組織化學(xué)研究用試劑、細(xì)胞培養(yǎng)用試劑、細(xì)胞分離試劑、凝膠內(nèi)擴(kuò)散法及電泳試劑等。
（2）基因工程用試劑包括基因表達(dá)與基因重組、人工合成蛋白、激素、核酸合成試劑、核酸制劑、內(nèi)切酶等。
（3）誘變劑和致癌物質(zhì)主要供測(cè)定工作場(chǎng)所與生活環(huán)境中的毒物質(zhì)的致癌性與化學(xué)毒物的致突變性。
（4）臨床診斷試劑主要供醫(yī)療系統(tǒng)中的臨床病理診斷、生化診斷、液晶診斷、同位素診斷與一般化學(xué)診斷等診斷檢查中所用的一大類化學(xué)試劑。
（5）工業(yè)用化學(xué)品包括試制開發(fā)的工業(yè)用化學(xué)品，有四千種以上，還在不斷增加。

管理竅門：
一般按用途可以分為通用試劑、高純?cè)噭⒎治鲈噭?a target="_blank" >儀器分析試劑、臨床診斷試劑、生化試劑、無機(jī)離子顯色劑試劑等。有四種常用規(guī)格：
1.優(yōu)級(jí)純或一級(jí)品(GR 精密分析和科學(xué)研究工作)；
2.分析純或二級(jí)品(AR 重要分析和一般研究工作)；
3.化學(xué)純或三級(jí)品(CP 工礦及學(xué)校一般化學(xué)實(shí)驗(yàn))；
4.實(shí)驗(yàn)試劑(L.P.)。
大多數(shù)的試劑具有一定的毒性及危險(xiǎn)性。對(duì)科研試劑的加強(qiáng)管理，不僅是保證分析結(jié)果質(zhì)量的需要，也是確保人民生命財(cái)產(chǎn)安全的需要。試劑應(yīng)根據(jù)毒性、易燃性、腐蝕性和潮解性等不同的特點(diǎn)，以不同的方式妥善管理。
保存注意事項(xiàng)：低溫、避光、干燥陰涼處封閉貯存，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混放、混運(yùn)。本品為非危險(xiǎn)品，可按一般化學(xué)品運(yùn)輸，輕搬動(dòng)輕放，防止日曬、雨淋。
我們提供的試劑產(chǎn)品品質(zhì)優(yōu)良，都是通過嚴(yán)格的檢測(cè)體系認(rèn)證。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司