乙酰膽堿酯酶（AChE）活性發(fā)光檢測_技術(shù)文章

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乙酰膽堿酯酶（AChE）活性發(fā)光檢測
閱讀次數(shù)：691 發(fā)布時間：2018/8/21 16:16:12

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簡介：
乙酰膽堿（acetylcholine,ACh）是一種神經(jīng)遞質(zhì)，能特異性的作用于各類膽堿受體。乙酰膽堿參與神經(jīng)遞質(zhì)過程，在下一次神經(jīng)沖動開始前乙酰膽堿會被AChE 降解掉。AChE 會被神經(jīng)內(nèi)毒素和殺蟲劑所抑制，由于神經(jīng)內(nèi)毒素和殺蟲劑對人和動物的嚴(yán)重毒副作用而成為很多科學(xué)家所關(guān)注的一個領(lǐng)域。另外，在一些疾病治療過程中，例如在Alzheimer＇s 疾病中，研究人員也對AChE 抑制劑可能產(chǎn)生的功能進行了研究。
AChE 活性檢測試劑盒使用乙酰膽堿經(jīng)過一系列酶促反應(yīng)，在發(fā)光反應(yīng)中快速地將反應(yīng)中活性AChE 的量以光信號形式輸出。樣品中的AChE 抑制劑的存在使得樣品中ATP 水平升高，這可以通過發(fā)光來定量。

檢測方法：
以aCella – AchE檢測試劑盒為例
1. 試劑準(zhǔn)備
將A、B、C三個溶液分別避光溶解，并且平衡到室溫。
2. 樣品準(zhǔn)備
對照1：加入溶液50ulC，不包含AChE，代表100%抑制
對照2：加入溶液50ulA，不加入樣品或抑制劑，代表無抑制
樣品：加入10-50ul樣品或抑制劑，重復(fù)設(shè)置三個復(fù)孔
對以上所有待測液加入50ul溶液B
3. 檢測結(jié)果
次檢測時，可以對單個樣品多次檢測發(fā)光，每次間隔30秒，以確定反應(yīng)的穩(wěn)定時間。
然后所有樣品在這個時間點上檢測發(fā)光值。

參考文獻(xiàn)：
Schallreuter KU et al. Activation/deactivation of acetylcholinesterase by H2O2: more evidence for oxidative stress in vitiligo. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Mar 5;315(2):502-8.
Bolognesi ML et al. Propidium-based polyamine ligands as potent inhibitors of acetylcholinesterase ａnd acetylcholinesterase-induced amyloid-beta aggregation. J Med Chem. 2005 Jan 13;48(1):24-7.

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司