技術(shù)文獻
質(zhì)粒分為嚴緊型和松弛型復(fù)制。
根據(jù)質(zhì)粒DNA復(fù)制與宿主之間的關(guān)系或在宿主細胞的拷貝數(shù)的多少,可以將質(zhì)粒分為兩種不同的復(fù)制類型:嚴緊型和松弛型。嚴緊型質(zhì)粒復(fù)制受宿主染色體DNA復(fù)制的嚴格控制,拷貝數(shù)較小一般只有1~3個拷貝。疏松型質(zhì)粒的復(fù)制宿主的控制比較松,在宿主中的拷貝數(shù)比較多,一般有10~200個拷貝,有時可達到700個。
按基因轉(zhuǎn)移性:
分兩類:
(1)傳遞性質(zhì)粒:常為大型、嚴緊型質(zhì)粒;
(2)非傳遞性質(zhì)粒:多為小型、松弛型質(zhì)粒。
按遺傳性狀、產(chǎn)物分類:
(1)抗生素抗性:如氨芐西林、氯霉素抗性;
(2)限制酶-修飾酶(R-M)系統(tǒng):如hsdR-菌株可使DNA甲基化,但不限制外源DNA;hsd-菌株為限制和甲基化雙缺陷型。
人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體分類:
高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體:ColE1、pMB1派生質(zhì)粒具有高拷貝數(shù)的特點。適合大量增殖克隆基因,或需要大量表達的基因產(chǎn)物。低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體:由 pSC101派生來的載體特點是分子量小的拷貝數(shù)。它有特殊的用途:當有些被克隆的基因的表達產(chǎn)物過多時會嚴重影響寄主菌的正常代謝活動,導(dǎo)致寄主菌的死亡時,就需要低拷貝的載體。
失控的質(zhì)粒載體
這是一類溫度敏感型復(fù)制控制質(zhì)粒。如pBEU1、 pBEU2。
插入失活型克隆載體。載體的克隆位點位于其某一個選擇性標記基因內(nèi)部。如pDF41、pDF42。
正選擇的質(zhì)粒載體
直接選擇轉(zhuǎn)化后的細胞。只有帶有選擇標記基因的轉(zhuǎn)化菌細胞才能在選擇培養(yǎng)基上生長。
原創(chuàng)作者:上海遠慕生物科技有限公司
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