0.01M 磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法
PBS緩沖液是大家做ELISA實(shí)驗(yàn)室必須用到的，其配置各有自己的方法，希望下面的方法對(duì)大家有些幫助！
稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)
溶液的pH值至7.4，*后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2（1034×105Pa）高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4℃冰箱中。
需要注意的是，通常所說(shuō)的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na 離子或K 離子的濃度，Na 離子和K 離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話，則需要在配置的時(shí)候分別加入100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH、定容、滅菌消毒。
NaCl 8.0g ； KCl 0.2g ； Na2HPO4 1.44g ； KH2PO4 0.24g ；加蒸餾水 至 1000ml，調(diào)節(jié)pH 到 7.4（用Na2HPO4或KH2PO4調(diào)節(jié)） 。
用于免疫反應(yīng)時(shí)可加入 0.1%疊氮鈉（0.1g/100ml PBS）；當(dāng)試劑中含有辣根過(guò)氧化物酶時(shí)，嚴(yán)禁使用疊氮鈉，可改用0.01%柳硫汞。
PBS緩沖液配方
PH 7.6 7.4 7.2 7.0
H2O 1000 1000 1000 1000
NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5
Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2
NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4
根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過(guò)晝夜的時(shí)間后，PH值會(huì)明顯改變（我親自測(cè)過(guò)偏酸）。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了，PH值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣，要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問(wèn)題。每次使用前用試紙測(cè)一下過(guò)夜了的PBS，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。
PBS緩沖液
稱取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4，加水定容至1L，常溫保存?zhèn)溆谩?br />
PBST緩沖液
取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中，混勻后即刻使用。現(xiàn)用現(xiàn)配。
如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時(shí)候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時(shí)，PH在6.5左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更方便的方法。
十倍稀釋以后，PH自動(dòng)升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個(gè)可以先取少量試一試，配好之后再測(cè)一次~
PH8.0的PBS配方詳細(xì)
1. NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L
2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?br />
3. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至8.0，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。
4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。
注意：上述PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
0.05mol/L PBS（磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS）的配制：
甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液 ：稱取磷酸氫二鈉9.465g 7.099g,加蒸 餾水至1000ml ;
乙液：0.05mol/L KH2P04溶液： 稱取磷酸二氫鉀， 9.07g 6.803g,加蒸餾水至1000m1。
將甲乙液分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于4℃冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液，見(jiàn)下表：
pH 甲液ml 乙液mI
5.29 2.5 97.5
5.59 5.0 95.0
5.91 10.0 90.0
6.24 20.0 80.0
6.47 30.0 70.0
6.64 40.0 60.0
6.81 50.0 50.0
6.98 60.0 40.0
7.17 70.0 30.0
7.38 80.0 20.0
7.73 90.0 10.0
8.04 95.0 5.0
你要配制pH=6.8的PBS，可用甲、乙液各50ml混合即可。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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