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技術(shù)文獻(xiàn)

看完這篇文章你就知道elisa試劑盒原理是什么了
閱讀次數(shù):510 發(fā)布時(shí)間:2017/5/24 10:42:06
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    上海遠(yuǎn)慕是國(guó)內(nèi)elisa試劑盒優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商,本司代理銷(xiāo)售不同elisa試劑盒品牌的進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒,專(zhuān)業(yè)供應(yīng)科研實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基,抗體,動(dòng)物血清血漿,標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品" >標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品化學(xué)試劑,酶聯(lián)免疫試劑盒,白介素試劑盒,金標(biāo)檢測(cè)試劑盒,微生物,蛋白質(zhì),ELISA種屬涵蓋廣,憑借多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn),完善的售后服務(wù),高質(zhì)量的產(chǎn)品,贏得客戶(hù)一致好評(píng),歡迎來(lái)電咨詢(xún)!

    免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開(kāi)優(yōu)質(zhì)的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái),隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。
    HBsAg試劑特點(diǎn)(檢測(cè)模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位,可測(cè)得HBsAg變異樣品,提高檢測(cè)的特異性(99。98%)提高檢測(cè)的靈敏度,應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(shuō)(PEI)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0。05ng/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0。025ng/mlELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國(guó)型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過(guò)氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會(huì)與次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng) ,只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并在長(zhǎng):450nm處測(cè)量O.D。值,按照本HEV IgM抗體ELISA試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn),O.D。值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。

    操作方法:

    雙抗體夾心法:

    1、包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃隔夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,下同)。

    2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

    3、加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

    4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

    5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

    6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

    間接法:

    1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃隔夜;

    2、次日洗滌3次;

    3、加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;

    4、(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;

    5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;

    6、*后一遍用DDW洗滌。

    其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

    優(yōu)勢(shì)試劑推薦:

    人鈣激活中性蛋白酶1(CAPN1)ELISA檢測(cè)試劑盒

    山羊白介素12B(IL12B)ELISA酶免試劑盒

    人硫酸雌酮(E1S)ELISA試劑盒使用

    人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O((LLO)ELISA試劑盒

    犬孕酮(P)ELISA試劑盒,96T/48T,KB13743

    小鼠鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)ELISA酶免試劑盒,Mice keyhole limpet hemocyanin (KLH) ELISA kit

    鴨病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA酶免試劑盒

    小鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA試劑盒使用

    人甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒,96T/48T,KB12481

    山羊轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGFβ3)ELISA試劑盒

    大鼠D乳酸脫氫酶(DLDH)ELISA試劑盒,96T/48T,KB15764

    人孕酮受體(PGR)ELISA試劑盒,96T/48T,KB12077

    人促黃體激素(LH)ELISA酶免試劑盒

    小鼠骨橋素(OPN)ELISA試劑盒

    大鼠膠原酶I(CollagenaseI)ELISA酶免試劑盒

    人可溶性CD276分子(sCD276/sB7H3)ELISA酶免試劑盒,Human soluble CD276 molecule (sCD276 / sB7H3) ELISA kit

    人叉頭框蛋白01(FoxO1)ELISA試劑盒使用

    人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒

    人溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T

    人抗谷氨酸脫羧酶抗體(Anti-GAD)ELISA酶免試劑盒,Human glutamic acid decarboxylase antibody (Anti-GAD) ELISA kit.

    兔子Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA酶免試劑盒

    雞免疫球蛋白MELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T

    小鼠16α羥基雌酮1(16-αOHE-1)ELISA檢測(cè)試劑盒

    人Ⅱ型膠原交聯(lián)C端肽(CTXⅡ)ELISA酶免試劑盒,People Ⅱ collagen cross-linked C-telopeptide (CTXⅡ) ELISA kit

    牛β乳球蛋白(βLg)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T

    小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T

    人白介素18(IL-18)ELISA試劑盒,96T/48T,KB10711

    小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒使用

    山羊補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA檢測(cè)試劑盒

    兔子谷胱甘肽(GSH)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T

    大鼠β-防御素(β-Defensins)ELISA酶免試劑盒,Rat βdefensin (β-Defensins) ELISA kit.

    牛白介素-12(IL-12)ELISA酶免試劑盒

    豬白介素12(IL12)ELISA檢測(cè)試劑盒

    牛白介素15(IL15)ELISA試劑盒,96T/48T,KB16242

    兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISA試劑盒使用

    猴過(guò)氧化氫酶(CAT)ELISA酶免試劑盒,Monkey catalase (CAT) ELISA kit

    犬α1微球蛋白(α1MG)ELISA檢測(cè)試劑盒

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